花生蛋白ACE抑制肽的制備和降血壓效果的研究.pdf

1、本文以花生粕為原料，運(yùn)用二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)對(duì)花生蛋白的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化；以血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(Angiotensin converting enzyme，ACE)抑制率為指標(biāo)，從六種商業(yè)蛋白酶中篩選出堿性蛋白酶進(jìn)行酶解，制備高活性的ACE抑制肽；選用凝膠層析法進(jìn)行純化分離；用凝膠電泳研究了分子量的分布；使用高效液相和質(zhì)譜聯(lián)用對(duì)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步分析；選用自發(fā)性高血壓大鼠(Spontaneouslyhypertensive rat，

2、SHR)進(jìn)行了降血壓的體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。研究結(jié)果如下： 1.二次浸提對(duì)蛋白的提取率有顯著的影響。采用堿提酸沉淀法，結(jié)合DPS軟件分析，研究了溫度、pH和料液比對(duì)蛋白質(zhì)提取率的影響。結(jié)果表明：花生蛋白質(zhì)提取條件較優(yōu)的范圍為：溫度為52-55℃，pH為9.3-9.6，料液比為1：9.7-1:10.3，在相同的條件下，進(jìn)行二次浸提，每次浸提2h。 2.采用響應(yīng)面法篩選出堿性蛋白酶(Alcalase)酶解花生蛋白制備ACE抑制肽，以

3、ACE抑制率為響應(yīng)值，研究了溫度、底物濃度和酶與底物濃度比對(duì)ACE活性的影響。結(jié)果表明：生產(chǎn)ACE抑制肽的最優(yōu)組合為溫度53.7℃，底物濃度7.72％，酶與底物濃度比4.18％，pH8.0，水解時(shí)間為120min。 3.經(jīng)凝膠層析的方法對(duì)ACE抑制肽進(jìn)行了分離和純化，通過(guò)Tricine-SDS-PAGE電泳法分析了各組分的分子量的分布，結(jié)果表明：分子量小于1500D的小肽具有較高的ACE抑制率。 4.對(duì)于高活性的ACE抑

4、制肽通過(guò)高效液相和質(zhì)譜分析表明：經(jīng)凝膠柱分離的單一組分仍然是由分子量不同的許多肽組成的混合物，其分子量主要分布在300-700D。 5.通過(guò)自發(fā)性高血壓大鼠的急性降壓實(shí)驗(yàn)表明：在給藥后120min血壓開(kāi)始明顯下降，在給藥后120min、150min、180min、210min時(shí)間段的血壓與給藥前比較均有明顯的降壓效果，平均動(dòng)脈血壓分別下降了9.9％、12.2％、14.0％和13.1％；慢性降壓實(shí)驗(yàn)表明：連續(xù)灌服ACE抑制肽后，高