鮰魚皮明膠ACE抑制肽降血壓作用機理研究.pdf

1、由于治療高血壓的ACEI藥物的副作用明顯,食源性 ACE抑制肽就應(yīng)運而生,其來源廣、純天然、成本低、無毒性,為治療高血壓提供了另一條出路。本論文首先考察以斑點叉尾鮰魚皮明膠為原料制備的ACE抑制肽在胃腸道中的穩(wěn)定性以及抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶( ACE)的抑制劑類型;然后,選用原發(fā)性高血壓大鼠(SHR)為模型研究 ACE抑制肽在其體內(nèi)的降血壓活性;最后,再以Caco-2細胞為模型模擬小腸的消化吸收過程,對 ACE抑制肽的體內(nèi)吸收機制進行研究

2、。
　　(1)采用由鮰魚皮明膠提取并分離純化得到的ACE抑制肽:肽1(氨基酸序列:FTHNGYLNA)和肽2(氨基酸序列:SNTRVSAHKHCGSYLIIN)進行胃腸道的穩(wěn)定性和抑制劑類型研究。實驗結(jié)果表明:經(jīng)過模擬胃液作用后,鮰魚皮明膠 ACE抑制肽的ACE抑制率有一定的提升(肽1提高到96.7％,肽2提高到94.5%),但是在模擬腸液作用下,ACE抑制率有降低(肽1降低到77.6%,肽2降低到81.8%);通過酶反應(yīng)動力學(xué)

3、Lineweaver-Burk模型可以得出兩種 ACE抑制肽的抑制類型均為非競爭型抑制。
　　(2)采用原發(fā)性高血壓大鼠( SHR)為模型,進行一次性靜脈注射、一次性以及長期灌胃給藥實驗,研究鮰魚皮明膠 ACE抑制肽在SHR體內(nèi)的降血壓功能;長期灌胃結(jié)束后對實驗大鼠體內(nèi) ACE活性與AngⅡ含量進行測定。實驗結(jié)果表明:一次性靜脈注射和一次性灌胃給藥實驗對 SHR大鼠的血壓均有明顯的降低作用;長期給藥后,SHR大鼠血壓得到一定降低,

4、給藥劑量越大降血壓效果越明顯。長期灌胃結(jié)束后,低劑量組的血清中和組織中 ACE活性最高,中劑量組和高劑量組血清和組織中的ACE活性依次遞減,這表明服用魚皮明膠ACE抑制劑可以顯著降低體內(nèi) ACE的活性;高劑量組的大鼠血漿與組織中的AngⅡ含量顯著低于低劑量組,且呈劑量依賴性,這表明魚皮明膠 ACE抑制肽對大鼠血漿中 AngⅡ有顯著降低作用。
　　(3)通過測定 Caco-2細胞跨膜電阻(TEER)來判斷 Caco-2細胞模型是否成

5、功建立,然后用MTT法研究ACE抑制肽對Caco-2細胞的抑制。實驗結(jié)果表明:經(jīng)過21天的培養(yǎng)和分化,Caco-2細胞已經(jīng)形成了具有細胞極性的單分子層結(jié)構(gòu),且跨膜電阻已大于300Ω?cm2,符合作為藥物吸收轉(zhuǎn)運體外實驗?zāi)Ｐ偷幕疽蟆?-9mg/mL的ACE抑制肽溶液對 Caco-2細胞無明顯影響,存活率都在90%以上,在此濃度范圍內(nèi)均可進行 Caco-2細胞的轉(zhuǎn)運實驗。
　　(4)以Caco-2細胞為模型,模擬小腸進行 ACE抑

6、制肽的體內(nèi)吸收機制研究。實驗結(jié)果表明:ACE抑制肽具有一定的生物利用度,屬于吸收一般的物質(zhì),吸收率大概介于35%~50%之間。ACE抑制肽在Caco-2細胞模型中的轉(zhuǎn)運與溶解介質(zhì)的pH值、轉(zhuǎn)運時間都有關(guān)并且具有濃度依賴性,同時 Papp值隨著 ACE抑制肽濃度的增加而增大,因此排除以被動擴散為主要的轉(zhuǎn)運機制,而且胞吞抑制劑氧化苯胂對 ACE抑制肽的轉(zhuǎn)運沒有顯著影響,但打開細胞間緊密聯(lián)接的旁路轉(zhuǎn)運促進劑去氧膽酸鈉能極顯著的促進降血壓肽的轉(zhuǎn)