蘇州地區(qū)兒童肺炎支原體基因亞型及與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　對蘇州地區(qū)急性呼吸道肺炎支原體(Mycoplasma penumoniae,MP)感染患兒呼吸道分泌物標(biāo)本進行MP P1基因分型,并進行基因測序,探討蘇州地區(qū)肺炎支原體流行亞型,及其基因變異情況;同時收集不同型別 MP感染患兒的臨床資料,探討MP亞型與疾病嚴(yán)重程度之間的相互關(guān)系。
　　方法:
　　選取2012年1月-2013年12月蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院急性呼吸道MP感染患兒(共313例,包括門診MP感染患兒

2、49例,住院肺炎支原體肺炎患兒264例)的呼吸道分泌物為研究對象。
　　1.MP DNA提取:收集門診患兒咽試子及住院患兒鼻咽部分泌物;提取MP DNA,進行熒光定量PCR,選取經(jīng)PCR熒光探針法測定濃度>2.5*10^3(包括2.5*10^3)的標(biāo)本作為下一步MP分型標(biāo)本。
　　2.MP基因分型:通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(polymerase chain reaction-restriction fragm

3、ent length polymorphism, PCR-RFLP)和巢式多重PCR對313株Mp臨床分離株進行P1基因分型,并比較這2種方法在基因分型中的作用。
　　3.MP基因測序:挑選部分P1-Ⅰ型及P1-Ⅱ型標(biāo)本進行PCR反應(yīng),將其產(chǎn)物進行P1基因測序。
　　4.臨床資料收集:收集并比較不同型別 MPP(Mycoplasma penumoniae penumoniae,MPP)住院患兒的下列臨床資料:性別、年齡、臨床

4、表現(xiàn)、并發(fā)疾病,實驗室及影像學(xué)檢查結(jié)果及治療情況等。
　　結(jié)果:
　　1.通過對313例臨床標(biāo)本進行P1基因分型發(fā)現(xiàn),通過PCR-RPLF方法檢出P1-Ⅰ型32例(10.22％),P1-Ⅱ型1例(0.32％),280例(89.46％)均無P1-Ⅰ及P1-Ⅱ型型別檢出;巢式多重PCR方法檢出P1-Ⅰ型304例(97.12％),P1-Ⅱ型8例(2.56％), V2型變異株1例(0.32％),提示研究期間,蘇州地區(qū)發(fā)生的MP感染以

5、P1-Ⅰ型為主。將PCR-RPLF方法與巢式多重PCR方法進行對比發(fā)現(xiàn),巢式多重PCR方法對急性呼吸道 MP感染患兒呼吸道分泌物標(biāo)本提取的DNA進行 P1基因分型明顯優(yōu)于PCR-RPLF方法(P<0.05)。
　　2.將測序標(biāo)本的核苷酸序列在Genebank中用 BLAST與標(biāo)準(zhǔn)株 M129的P1基因(Sequence ID:NC_000912.1)比較發(fā)現(xiàn)3株P(guān)1-Ⅰ型臨床標(biāo)本中有2株發(fā)生點突變,另1株 P1-Ⅰ型臨床標(biāo)本與 M

6、129標(biāo)準(zhǔn)株基因序列一致。3株 P1-Ⅱ型臨床標(biāo)本與MP-FH標(biāo)準(zhǔn)株基因序列一致。
　　3.MPP住院患兒臨床資料分析顯示P1-Ⅰ型與P1-Ⅱ型MPP患兒在平均住院時間及發(fā)熱時間無明顯差異(P>0.05)。P1-Ⅰ型與P1-Ⅱ型MPP患兒在白細(xì)胞、CRP以及臨床肺部感染評分(The Clinical Pulmonary Infection Score,CPIS)上無明顯差異(P>0.05)。P1-Ⅱ型MPP患兒的血中性粒細(xì)胞比例高