動脈粥樣硬化血栓形成關鍵蛋白vWF A2結構域的結構與調控機制的研究.pdf

1、復 旦 大 學 碩 士 學 位 論 文動 脈 粥 樣 硬 億 血 檢 形 成 關健 蛋 合 vW FA Z 結構 城 的 結 構 與 調 控 機 制 的 研 究T h estr u c tu r a la n dfu n c tio n a lstu d yo fa th e r o th r o m b o sisr e la te dP r o te inv o n丫 V ille b r a n dF a c to rA Zd o

2、 m a in碩 士研 究 生 :學科 專 業(yè) :導 師 :指 導 小 組 成 員 :陳 華心 血 管 病 學羅 心 平 教授丁 建 平 教 授朱 軍 副 教 授李 劍 主 治 醫(yī)師20 11 年 4 月3. 7.1 結 晶板 準 備 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

3、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……223. 7. 2 蛋 白樣 品準 備 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . · · · · &#

4、183; · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · ……223. 7 . 3 懸 滴 法 結 晶 篩 選 和 優(yōu) 化 . . . …

5、…， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……233. 8 X 一 射 線 晶 體 衍 射 、 數(shù) 據(jù) 收 集 與 處 理 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

6、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……233. 8.1 晶體 的 低 溫 冷 凍 與 衍 射 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……233. 8. 2 X 一 射 線 衍

7、射 數(shù) 據(jù) 的 收 集 和 處 理 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……233. 8. 3 晶體 結 構 的 測 定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

8、 . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . ……， . …233 . 9 分 子 動 力 學 模 擬 和 體 外 酶 切 實 驗 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . ……243 . 9 .1 分 子 動 力 學

9、 模 擬 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . · · · · ……243 . 9. 2 體 外 的 A D A M T S一 13 酶 切 實 驗 . . . .

10、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……254 技 術 路 線 圖 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . .

11、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……265 實驗 結 果 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

12、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……275 .1.1 突 變 體 A Z 表 達 質 粒 的構 建 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

13、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……275 .1. 2 突 變 體 A Z 蛋 白原 核 表 達 的條 件 優(yōu) 化 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……275 .1. 3 突 變 體 A Z 蛋 白純 化 . . . . .

14、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……285.1. 4 A 2 突 變 體 的 晶 體 篩 選 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

15、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……305.1. 5 X 射 線 晶體 衍 射 、數(shù) 據(jù) 收 集 和 晶 體 結 構 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

16、. . . . . . . ……315.1. 5 .IX 射 線 晶 體 衍 射 、數(shù) 據(jù) 收集 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……315 .1. 5 . 2 A 2 突 變 體 的 晶 體 結 構 . . . . . . . . . . . . .

17、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……325.1. 5. 3 A 2 突 變 體 與 野 生 型 A Z 結 構 的 比較 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

18、. . . . . ……325 .1. 5 . 4 金 屬 離 子 的 鑒 定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……335.1. 6 分 子 動 力 學 模 擬 實驗 結 果 .

19、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……345.1. 7 A 2 結 構 域 的 體 外 酶 切 實 驗 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

20、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……356 討 論 . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

21、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……37參 考 文 獻 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

22、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……40致 謝 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

23、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……44已發(fā) 表 文 章 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

24、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……45附 綜 述 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

25、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……46附 已 發(fā) 表 文 章 . . . . . . . . . . . . . . .