c-Ski在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用、機(jī)制與調(diào)控研究.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是動(dòng)脈壁粥樣斑塊形成、引起血管彈性及功能降低甚至堵塞,從而導(dǎo)致血管所營(yíng)養(yǎng)的組織失去營(yíng)養(yǎng)及缺血缺氧壞死的一種慢性進(jìn)行性疾病。其中,血管平滑肌細(xì)胞(vascularsmoothmusclecell,VSMC)的異常增殖及遷入內(nèi)膜導(dǎo)致新生內(nèi)膜形成是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵因素之一。
　　c-Ski,是禽類白血病轉(zhuǎn)化病毒v-Ski的細(xì)胞內(nèi)同源物,其最早作為原癌基因而被發(fā)現(xiàn)。隨后,在

2、發(fā)育及腫瘤研究中證實(shí)c-Ski可作為T(mén)GF-β/smad途徑的輔阻遏子,通過(guò)抑制Smad磷酸化及活性復(fù)合物形成而阻斷TGF-β/smad對(duì)靶基因的調(diào)控。此前,諸多研究表明,TGF-β激活smad3信號(hào)通路是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化中血管平滑肌細(xì)胞異常增殖的主要原因之一。由此,我們推測(cè)c-Ski將有可能通過(guò)影響TGF-β下游信號(hào)通路而對(duì)血管平滑肌細(xì)胞的異常增殖發(fā)揮重要調(diào)控作用。為此,我們借助體外大鼠血管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)、大鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型等對(duì)c-

3、Ski的作用、機(jī)制以及其自身的基因表達(dá)調(diào)控等進(jìn)行了探索。具體研究?jī)?nèi)容為:
　　1、用TGF-β刺激大鼠血管平滑肌細(xì)胞A10細(xì)胞模擬在體血管平滑肌細(xì)胞異常增殖情況,過(guò)表達(dá)及干擾A10細(xì)胞中c-Ski表達(dá),觀察其對(duì)細(xì)胞增殖的影響;并借助細(xì)胞信號(hào)通路檢測(cè)明確其分子機(jī)制。
　　2、構(gòu)建大鼠球囊損傷致動(dòng)脈粥樣硬化模型,借助c-Ski體內(nèi)基因遞送觀察其對(duì)在體致傷動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞增殖、新生內(nèi)膜形成的影響,進(jìn)一步從在體證實(shí)c-Ski在動(dòng)脈

4、粥樣硬化中的作用與機(jī)理。
　　3、基于本課題組前期對(duì)過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisomeproliferatorsactivatedreceptorsγ,PPARγ)對(duì)c-Ski表達(dá)調(diào)控的初步研究,進(jìn)而利用生物信息學(xué)分析、熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)、凝膠遷移滯后實(shí)驗(yàn)、染色質(zhì)共沉淀實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)等進(jìn)一步闡明PPARγ對(duì)c-Ski的調(diào)控機(jī)制。
　　4、動(dòng)態(tài)檢測(cè)大鼠高脂飲食及球囊損傷兩種動(dòng)脈粥樣硬化模型中動(dòng)脈壁內(nèi)源性c

5、-Ski的mRNA及蛋白表達(dá)變化,探索內(nèi)源性c-Ski在動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程中的基因表達(dá)調(diào)控機(jī)理及對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程的影響。
　　通過(guò)上述研究,我們證實(shí):
　　1、c-Ski能顯著抑制血管平滑肌細(xì)胞異常增殖及血管內(nèi)膜增生,具有抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。其分子機(jī)制在于c-Ski抑制TGF-β/Smad3信號(hào)通路而促進(jìn)p38信號(hào)通路,從而上調(diào)了p21和p27。
　　2、c-Ski是核受體PPARγ的又一靶基因,PPARγ可通過(guò)與其5

6、'-UTR的-865~-853處DR1序列“AGGTAAGGGGACA”結(jié)合,從轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)c-Ski而發(fā)揮對(duì)血管平滑肌細(xì)胞異常增殖的抑制作用。
　　3、在大鼠高脂飲食及球囊損傷模型中,動(dòng)脈組織內(nèi)源性c-Ski蛋白水平進(jìn)行性降低,而mRNA水平卻無(wú)顯著變化,表明其受到轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控。生物信息學(xué)分析及初步實(shí)驗(yàn)表明miR-17-5p可能與c-Ski3'-UTR結(jié)合而從轉(zhuǎn)錄后水平抑制c-Ski表達(dá)、并促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖。