肺腺癌淋巴管生成相關(guān)基因的篩選和初步鑒定.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文肺腺癌淋巴管生成相關(guān)基因的篩選和初步鑒定姓名：趙偉鵬申請學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：陳正堂20090501第三軍醫(yī)人學(xué)博士學(xué)位論文目的利用全基因組芯片篩選技術(shù)，采用Hum鋤GenomeU133Plus2OA玎ay差異篩選肺腺癌淋巴管生成相關(guān)的基因。通過GenBank數(shù)據(jù)庫生物信息學(xué)分析，結(jié)合已有文獻(xiàn)報(bào)道，確定被選的基因，初步驗(yàn)證其在腫瘤淋巴管生成中的作用。方法1免疫組織化學(xué)法檢測淋巴管內(nèi)皮標(biāo)記物Podop

2、lanin在34例肺腺癌組織和5例肺良性病變組織中的表達(dá)，計(jì)算LVD，按LVD評(píng)分對肺腺癌淋巴管高、低轉(zhuǎn)移進(jìn)行分組，分析LVD與腫瘤分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等的關(guān)系。2采用全基因組芯片篩選的方法，構(gòu)建肺腺癌高淋巴管生成和低淋巴管生成差異表達(dá)的基因文庫(cDNAlibrary)，采用HumanGenomeU133Plus20A11ray篩選肺腺癌淋巴管生成相關(guān)的基因，GenBank數(shù)據(jù)庫生物信息學(xué)分析，結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道選取上調(diào)和下調(diào)基因，采

3、用realtimePCR進(jìn)一步驗(yàn)證差異表達(dá)情況。3以NSCLC為研究對象，利用免疫組織化學(xué)方法檢測NSCLC組織中上調(diào)基因(以IGFBP7為對象)、下調(diào)基因(以CDHl為對象)的表達(dá)情況，分析IGFBP7、CDHl表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。4RTPcR檢測人肺癌細(xì)胞株和小鼠肺癌細(xì)胞株(1ewislungcancerLLC)的IGFBP7的表達(dá)。5構(gòu)建IGFBP7干擾載體pGenesilsiIGFBP7，

4、通過siRNA干擾IGFBP7表達(dá)。6應(yīng)用不完全弗氏佐劑(M)誘導(dǎo)小鼠腹腔淋巴管瘤形成，消化法分離獲得LEC，以鼠尾膠為粘貼劑原代培養(yǎng)。淋巴管形成實(shí)驗(yàn)判定LEC能否形成管樣結(jié)構(gòu)。7建立LLC與LEC共培養(yǎng)體系，用CCK8細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)和TransweU小室細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)，分析敲減IGFBP7前后LLC細(xì)胞對LEC生長和遷移的影響。8利用C57BL／6小鼠建立敲減IGFBP7的LLC和未敲減IGFBP7的LLC皮下移植瘤模型，利用免疫熒光和共

5、聚焦顯微鏡觀察腫瘤新生淋巴管情況，分析敲減IGFBP7對移植瘤生長、淋巴管生成、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肺轉(zhuǎn)移的影響。結(jié)果1Podopl鋤in陽性淋巴管LvD在5例肺炎性假瘤為lO8“3，在34例肺腺癌瘤內(nèi)為1125o，肺腺癌瘤周為23584，瘤周LVD明顯高于前二者(尸o05)。腫瘤分期N12與N0瘤周的LVD分別是24387、18463，前者明顯高于后者(Po01)；III期與IIIⅣ瘤周的LVD分別是18456、24182，前者明顯低于后者(