CYP11A1、CYP 2E1在IGF-1通過線粒體機制保護(hù)心肌細(xì)胞免于凋亡中的作用.pdf

1、[目的]
　　 心肌細(xì)胞凋亡是心血管疾病發(fā)生和發(fā)展的重要原因，胰島素樣生長因子1（Insulin-like growth factors1，IGF-1）可以保護(hù)心肌細(xì)胞免于凋亡。本課題組進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，IGF-1可以通過下調(diào)細(xì)胞色素c家族成員的表達(dá)。由于細(xì)胞色素c是參與線粒體代謝的主要成員，本實驗旨在觀察IGF-1對于處于誘導(dǎo)凋亡條件下心肌細(xì)胞線粒體形態(tài)、膜通透性和膜電勢等的影響，觀察是否可以通過下調(diào)細(xì)胞色素c家族的相關(guān)成員的基

2、因表達(dá)，從而改善誘導(dǎo)凋亡狀態(tài)下的心肌細(xì)胞的線粒體功能。對心肌細(xì)胞的凋亡機制做出重要的補充，為心臟病的防治提供新的依據(jù)。
　　 [方法]
　　 (1)體外培養(yǎng)乳鼠原代心肌細(xì)胞;
　　 (2)用半定量、定量PCR法及westernblot法觀察IGF-1對CYP11A1、CYP2E1基因水平和蛋白水平的影響;
　　 (3)利用siRNA技術(shù)下調(diào)CYP2E1、CYP11A1基因表達(dá)，用JC-1線粒體膜電位檢測法

3、、透射電鏡觀察被誘導(dǎo)凋亡的心肌細(xì)胞線粒體膜電位和形態(tài)的改變，用AnnexinV-FITC/PI雙染色法、Hoechst33258、Caspase-3、TUNEL等檢測方法觀察心肌細(xì)胞凋亡的改善情況。
　　 [結(jié)果]
　　 (1) IGF-1能夠明顯改善心肌細(xì)胞凋亡的情況;
　　 (2) IGF-1可以下調(diào)心肌細(xì)胞中CYP11A1、CYP2E1基因的表達(dá);
　　 (3)特異性下調(diào)CYP11A1、CYP2E1

4、后，心肌細(xì)胞線粒體膜電位明顯下降率下降(P＜0.05)，線粒體形態(tài)明顯改善，caspase-3酶活性降低(P＜0.05)，細(xì)胞凋亡率明顯下降(P＜0.05)，與IGF-1抗心肌細(xì)胞凋亡效應(yīng)相似。
　　 [結(jié)論]
　　 (1) IGF-1能夠明顯改善心肌細(xì)胞凋亡的情況;
　　 (2)IGF-1可以下調(diào)細(xì)胞色素C家族成員CYP11A1、CYP2E1的表達(dá)，特異性沉默細(xì)胞色素C家族成員CYP11A1、CYP2E1可以改