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文檔簡(jiǎn)介
1、 目的：制備小鼠DEAF1(Deformed epidermal autoregulatory factor-1)的單克隆抗體和多克隆抗體,探索該抗體用于免疫組織化學(xué)、Western blot、免疫熒光、免疫沉淀等分析技術(shù)中的可能性。
方法：首先應(yīng)用重組DNA技術(shù)將Deaf1全長(zhǎng)cDNA插入原核表達(dá)載體pET-28a(+)中,構(gòu)建DEAF1的原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a(+)-mDF1；然后轉(zhuǎn)化該重組質(zhì)粒至感受態(tài)E. col
2、i. BL21中,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)高效表達(dá)出重組DEAF1蛋白；再以尿素梯度裂解包涵體純化所獲得的DEAF1重組蛋白作為抗原免疫Balb/C小鼠；最后直接取血獲取鼠抗DEAF1的多克隆抗血清并通過雜交瘤技術(shù)制備鼠抗DEAF1的單克隆抗體,所得抗體的特異性、敏感性及親和力用Western blot免疫熒光,免疫組織化學(xué)以及免疫沉淀等技術(shù)檢測(cè)。
結(jié)果：成功獲得了鼠抗DEAF1的多克隆抗血清,經(jīng)免疫組織化學(xué),Western blot
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