G-蛋白表達(dá)水平與乙醇性脂肪肝發(fā)生發(fā)展及肝癌細(xì)胞系HepG2的增殖抑制關(guān)系的初步研究.pdf

1、目的：探討G蛋白(Guanine nucleotide-binding proteins，G-protein)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在乙醇性脂肪肝發(fā)病及其在褪黑素抑制肝癌細(xì)胞系HepG2增殪中的作用。 方法：采用高脂飲食配合乙醇灌胃，制備大鼠脂肪肝模型。6周末取血，檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)，門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)，甘油三酯(TG)，總膽固醇(TC)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)；制備石蠟及冰凍切片，進(jìn)行肝臟病理學(xué)檢查。

2、Western blot分析各組大鼠肝臟組織中抑制型G蛋白α1(Gαi1)，抑制型G蛋白α2(Gαi2)，抑制型G蛋白α3(Gαi3)，刺激型G蛋白(Gαs)表達(dá)水平的改變。采用MTT法檢測MT(Melatonin，褪黑素)對肝癌細(xì)胞HepG2生長的影響，放免法檢測細(xì)胞內(nèi)cAMP水平，western blot法檢測抑制型G蛋白α1(Gαi1)，抑制型G蛋α2(Gαi2)，抑制型G蛋白α3(Gαi3>，刺激型G蛋白(GαS)表達(dá)水平。

3、 結(jié)果：乙醇聯(lián)合高脂飲食條件下大鼠血清ALT，AST，TG，Te明顯升高且伴有HDL-C的顯著下降；HE及Oil Red O(油紅O)染色結(jié)果顯示乙醇聯(lián)合高脂飲食組大鼠肝臟脂肪變明顯；模型組大鼠肝組織中的Gotil，Gαi2，Gαs表達(dá)明顯下降，Gαi3的表達(dá)水平在模型組中呈增高趨勢，同時還發(fā)現(xiàn)模型組大鼠肝臟組織骨橋蛋白(Osteopontin，OPN)明顯升高，且與乙醇劑量正相關(guān)。MTT檢測結(jié)果表明，MTT在10-8mol.L-1

4、的濃度范圍內(nèi)，72h共培養(yǎng)后，可有效抑制HepG2細(xì)胞增殖，且呈一定的時聞.濃度依賴關(guān)系.為進(jìn)一步研究MT細(xì)胞增殖抑制作用與G蛋白-CAMP信號通路的關(guān)系，檢測濃度10-5mol.L-1的MT作用HepG2細(xì)胞Omin，15min，30min，45min，60min，90min，120min后Gαi1，Gαi2，Gαi3和Gsα和細(xì)胞內(nèi)cAMP水平變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MT作用HepG2細(xì)胞30min后可明顯下調(diào)Gαi1，Gαi2，Gαi3的表