TNF-α、IL-6、IL-8、RANTES及MCP-1基因多態(tài)性與呼吸道合胞病毒毛細支氣管炎的相關(guān)性.pdf

1、目的： 1.研究腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細胞介素(IL)-6、IL-8、調(diào)節(jié)激活正常T細胞表達、分泌的細胞因子(RANTES)及單核細胞趨化蛋白(MCP)-1基因多態(tài)性在溫州地區(qū)漢族兒童中的分布特征； 2.探討TNF-α-308G/A、IL-6-174G/C、IL-8-251A/T和781C/T、RANTES-403G/A、MCP-1-2518G/A單核苷酸多態(tài)性(SNP)及單體型與呼吸道合胞病毒(RSV)毛細支氣

2、管炎疾病易感性、病情嚴重程度、患兒年齡的相關(guān)性，篩選出RSV毛細支氣管炎遺傳易感性和疾病嚴重程度等臨床表型的候選基因。 方法： 1.病例組系2006年11月-2007年3月首次入住溫州醫(yī)學院附屬育英兒童醫(yī)院呼吸科病房，臨床診斷毛細支氣管炎，經(jīng)直接免疫熒光法(DIF)檢測鼻咽分泌物(NPS)中RSV抗原陽性確診為RSV感染的患兒，共150例，其中男性111例，女性39例；年齡1～24(6.99±4.24)個月；均為漢族；按

3、臨床癥狀分為輕度組和中重度組；根據(jù)年齡不同，分為≤6個月組和＞6個月組。對照組選擇同期在本院健康體檢的兒童120例，男性92例，女性28例；年齡2～24(7.89±3.63)個月；均為漢族；既往均無毛細支氣管炎病史、無特應(yīng)性疾病病史，亦無家族特應(yīng)性疾病史。兩組在性別和年齡構(gòu)成上差異無統(tǒng)計學意義。 2.以聚合酶鏈反應(yīng)-限制性酶切片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法檢測病例組和對照組兒童TNF-α-308G/A、IL-6-174G

4、/C、IL-8-251A/T和781C/T、RANTES-403G/A及MCP-1-2518G/A各位點的基因多態(tài)性，并進行基因型、等位基因型頻率及單體型分析。 3.從病例組和對照組分別隨機選取部分包含IL-6-174G/C位點的PCR擴增產(chǎn)物，采用DNA測序法進行測序分析。 結(jié)果： 1.TNF-α-308G/A位點基因多態(tài)性與RSV毛細支氣管炎的關(guān)系：病例組和對照組均發(fā)現(xiàn)TNF-α-308G/A位點基因多態(tài)性，

5、其中病例組可見GG、GA、AA3種基因型，以GG純合子基因型為主；對照組僅見GG、GA2種基因型，也以GG純合子基因型為主。病例組TNF-α-308位點GG、GA、AA基因型頻率分別為68.0％、28.0％、4.0％，G、A等位基因頻率分別為82.0％、18.0％；對照組TNF-α-308位點GG、GA基因型頻率分別為80.8％、19.2％，G、A等位基因頻率分別為90.4％、9.6％：兩組基因型及等位基因頻率差異有顯著性，病例組A等位

6、基因的頻率明顯高于對照組(x2=5.665、7.726，P均＜0.05)：與G等位基因攜帶者相比，A等位基因攜帶者患RSV毛細支氣管炎的風險增加了2.071倍(OR=2.071，P＜0.05)；TNF-α-308G/A位點突變在輕度和中重度RSV毛細支氣管炎患兒之間的差異無統(tǒng)計學意義(x2=0.250，P＞0.05)；TNF-α-308G/A位點突變在≤6個月和＞6個月RSV毛細支氣管炎患兒之間的差異無統(tǒng)計學意義(x2=0.683，P＞

7、0.05)。 2.IL-6-174G/C位點基因多態(tài)性與RSV毛細支氣管炎的關(guān)系：病例組和對照組IL-6-174G/C位點均只見GG基因型，未見GC和CC基因型，提示溫州地區(qū)漢族兒童人群中不存在IL-6-174位點基因多態(tài)性。 3.IL-8-251A/T位點基因多態(tài)性與RSV毛細支氣管炎的關(guān)系：病例組和對照組IL-8-251A/T位點均可見AA、AT和TT3種基因型，均以雜合子AT型所占的比例最高；病例組IL-8-251

8、位點AA、AT、TT基因型頻率分別為12.0％、56.7％、31.3％，對照組分別為7.5％、54.2％、38.3％，兩組基因型頻率無顯著差異(x2=2.373，P＞0.05)；病例組IL-8-251位點A、T等位基因頻率分別為40.3％、59.7％，對照組則分別為34.6％、65.4％，兩組等位基因頻率亦無顯著差異(x2=1.875，P＞0.05)；IL-8-251A/T位點3種基因型在不同病情及年齡組間的差異均無顯著意義(x2=3.

9、775、0.662，P均＞0.05)。 4.IL-8781C/T位點基因多態(tài)性與RSV毛細支氣管炎的關(guān)系：病例組和對照組IL-8781C/T位點均可見CC、CT、TT3種基因型，兩組均以雜合子CT型為主；病例組IL-8781位點CC、CT、TT基因型頻率分別為38.7％、40.7％、20.6％，對照組分別為40.8％、41.7％、17.5％，兩組基因型頻率的差異無顯著意義(x2=0.442，P＞0.05)：病例組和對照組C、T等

10、位基因的頻率分別為59.0％、41.0％和61.7％、38.3％，兩組等位基因頻率差異亦無顯著意義(x2=0.396，P＞0.05)；病例組IL-8781位點3種基因型和2種等位基因頻率在輕度和中重度RSV毛細支氣管炎患兒之間差異有顯著性(x2=6.548，4.252；P均＜0.05)；該位點3種基因型在病例組≤6個月和＞6個月組間的差異無顯著意義(x2=0.821，P＞0.05)。 5.IL-8-251A/T和78lC/T連鎖

11、分析與單倍型分析及其與RSV毛細支氣管炎的關(guān)系：IL-8基因-251A/T和781C/T兩位點是連鎖的(D’=0.348±0.019，r2=0.114，P＜0.05)；病例組A-C單體型的頻率明顯大于對照組(x2=9.047，P＜0.05)。 6.RANTES-403G/A位點基因多態(tài)性與RSV毛細支氣管炎的關(guān)系：病例組和對照組RANTES-403位點均發(fā)現(xiàn)GG、GA、AA3種基因型，均以雜合子GA所占的比例最高：病例組RANT

12、ES-403位點GG、GA、AA基因型頻率分別為20.7％、63.3％、16.0％，G、A等位基因頻率分別為52.3％、47.7％；對照組3種基因型頻率分別為37.5％、46.7％、15.8％，等位基因頻率分別為60.8％、39.2％；兩組基因型及等位基因頻率的差異均有顯著性，病例組A等位基因的頻率明顯大于對照組(x2=10.024、3.912，P均＜0.05)；與攜帶G等位基因的個體相比，攜帶A等位基因的個體患RSV毛細支氣管炎的風險

13、增加了1.415倍(OR=1.415，P＜0.05)：病例組RANTES-403位點3種基因型在不同病情及年齡組間的差異均無顯著意義(x2=4.813、1.383，P均＞0.05)。 7.MCP-1-2518G/A位點基因多態(tài)性與RSV毛細支氣管炎的關(guān)系：病例組和對照組MCP-1-251.8位點均發(fā)現(xiàn)GG、GA、AA3種基因型，均以雜合子GA所占的比例最高；病例組MCP-1-2518位點GG、GA、AA基因型頻率分別為20.6％

14、、60.7％、13.3％，對照組分別為29.2％、52.5％、18.3％，兩組基因型頻率的差異無顯著意義(x2=2.098，P＞0.05)；病例組MCP-1-2518位點G、A等位基因頻率分別為56.3％、43.7％，對照組分別為55.4％、44.6％，兩組等位基因頻率的差異亦無顯著性(x2=0.045，P＞0.05)；MCP-1-2518位點3種基因型頻率在輕度和中重度RSV毛細支氣管炎患兒間的差異有顯著性(x2=6.846，P＜0.

15、05)；但該位點2種等位基因頻率在輕度和中重度組間無顯著差異(x2=1.165，P＞0.05)；3種基因型在不同年齡組間的差異無顯著性(x2=0.018，P＞0.05)。 結(jié)論： 1.溫州地區(qū)漢族兒童存在TNF-α-308G/A基因多態(tài)性；TNF-α-308A等位基因與RSV毛細支氣管炎的易感性相關(guān)，其可能是影響RSV毛細支氣管炎發(fā)病的一個重要候選基因，但未發(fā)現(xiàn)該位點與年齡、疾病的嚴重程度相關(guān)； 2.溫州地區(qū)漢族

16、兒童不存在IL-6-174G/C基因多態(tài)性： 3.溫州地區(qū)漢族兒童存在IL-8-251A/T和781C/T基因多態(tài)性；未發(fā)現(xiàn)IL-8-251A/T位點的變異與RSV毛細支氣管炎易感性、病情嚴重程度及年齡之間的相關(guān)性；未發(fā)現(xiàn)IL-8781C/T位點的變異與RSV毛細支氣管炎易感性及年齡之間的相關(guān)性；但IL-8-251A與781C形成的A-C單體型與RSV毛細支氣管炎的易感性相關(guān)； 4.溫州地區(qū)漢族兒童存在RANTES-40