Sonic hedgehog基因?qū)ΨN植體周圍骨缺損修復(fù)的影響.pdf

1、由于腫瘤、外傷、先天性疾病或嚴(yán)重的牙周炎等造成的牙槽骨缺損直接影響口腔修復(fù)重建。在牙槽骨骨缺損修復(fù)過程中，新生骨形成的速度、質(zhì)量和長期穩(wěn)定性與口腔種植義齒修復(fù)息息相關(guān)。自體骨或異體骨移植、屏障膜技術(shù)等傳統(tǒng)的治療策略，在修復(fù)牙槽骨缺損方面頗有成效。然而，新生骨組織仍然難以與原始骨相提并論?；蛟鰪?qiáng)型骨組織工程策略因其高效、穩(wěn)定的促進(jìn)骨再生，而受到越來越多的關(guān)注。骨代謝作用主要通過全身或局部的生長因子的調(diào)控。作為眾多成骨因子之中的一員，音猬

2、因子（Shh）能夠通過骨形成蛋白（BMP）及甲狀旁腺激素蛋白（PTHrP）等信號(hào)通路誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化，并在骨再生修復(fù)過程中發(fā)揮著重要的作用。本研究擬通過基因增強(qiáng)型骨組織工程方法，利用Shh修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與磷酸三鈣骨移植材料復(fù)合于犬牙槽骨缺損模型中，評價(jià)Shh基因在牙槽骨缺損修復(fù)中的骨再生能力。方法是構(gòu)建攜帶Shh基因的慢病毒載體，犬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞常規(guī)分離培養(yǎng)后轉(zhuǎn)導(dǎo)Shh慢病毒載體。熒光實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、蛋白

3、免疫印跡方法檢測外源Shh基因的表達(dá)情況，并通過檢測堿性磷酸酶活性及成骨相關(guān)因子的表達(dá)，體外評價(jià)Shh基因促骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的能力。繼而將轉(zhuǎn)基因細(xì)胞與β-磷酸三鈣材料復(fù)合，體外檢測三維培養(yǎng)條件對細(xì)胞生物學(xué)性狀、胞內(nèi)成骨因子水平的影響。最終將Shh基因增強(qiáng)型組織工程骨移植到犬下頜骨種植體周圍骨缺損區(qū)，分別于術(shù)后4周和12周通過影像學(xué)及組織形態(tài)學(xué)方法觀察Shh基因增強(qiáng)型組織工程骨對牙槽骨缺損修復(fù)的影響。研究結(jié)果顯示，Shh基因能夠有