硼替佐米或聯(lián)合三氧化二砷誘導(dǎo)jurkat細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)研究和livin mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：針對(duì)目前臨床對(duì)常規(guī)化療反應(yīng)差，容易早期發(fā)生中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病，出現(xiàn)難治復(fù)發(fā)的T細(xì)胞性急性淋巴細(xì)胞白血?。═-ALL），選用新型靶向抗腫瘤藥物硼替佐米單用或聯(lián)合三氧化二砷對(duì)該類白血病的jurkat細(xì)胞株進(jìn)行凋亡實(shí)驗(yàn)研究，并從基因水平探討其凋亡機(jī)制，進(jìn)而為臨床治療 T-ALL開辟一條新途徑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：將處于對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期的jurkat細(xì)胞株，經(jīng)5-25nmol/L硼替佐米單獨(dú)或聯(lián)合三氧化二砷處理24小時(shí)，采用 MTT法

2、檢測(cè)檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，并計(jì)算出 IC50值；選取 IC50值前后各藥物濃度刺激細(xì)胞株24小時(shí)后采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡，同時(shí)采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)檢測(cè)各藥物濃度對(duì)該細(xì)胞中凋亡抑制基因—livin基因的抑制情況。
　　結(jié)果：5-25nmol/L硼替佐米對(duì) jurkat細(xì)胞增殖均有一定抑制作用，隨著濃度增加抑制作用逐漸增

3、強(qiáng)其中24h IC50劑量為12.7nmol/L，其中20 nmol/L劑量作用24h達(dá)最大抑制效果，繼續(xù)增加劑量抑制效果無(wú)顯著增強(qiáng)（P<0.05）。三氧化二砷濃度為:5-25umol/L,分別處理 jurkat細(xì)胞后也顯示出明顯的劑量依耐性抑制效應(yīng)，其中24h IC50劑量為16.6umol/L，故選擇15 umol/L三氧化二砷與不同濃度的硼替佐米聯(lián)合。結(jié)果顯示，達(dá)到最大抑制濃度前，聯(lián)合處理組對(duì)細(xì)胞的抑制作用比同劑量?jī)伤幦我环N單獨(dú)使

4、用時(shí)都顯著增強(qiáng)（P<0.01）。流式細(xì)胞儀檢測(cè)對(duì)照組經(jīng)培養(yǎng)24h后細(xì)胞無(wú)明顯凋亡，而硼替佐米單藥組5 nmol/L、10 nmol/L、15 nmol/L處理24h的jurkat細(xì)胞較對(duì)照組顯示明顯凋亡，凋亡率分別是：（19.18±0.14）％、（27.97±0.53）%、（41.92±0.33）%，且隨著濃度增加凋亡率增加（P<0.01）；選擇15 umol/L三氧化二砷與硼替佐米5 nmol/L、10 nmol/L、15 nmol/

5、L聯(lián)合處理24h的jurkat細(xì)胞凋亡明顯比單藥處理組強(qiáng)，凋亡率分別是：（35.42±0.29）%、（47.12±0.64）%、（57.11±0.53）%（P<0.001）。各組細(xì)胞分別經(jīng)藥物作用24h后，硼替佐米組均能下調(diào) jurkat細(xì)胞 livin mRNA的表達(dá)，與對(duì)照組相比差異明顯（P<0.01）；硼替佐米單藥組與聯(lián)用組不同干預(yù)濃度之間均有差異，且隨著藥物濃度的增加，livin mRNA的表達(dá)逐漸降低（P<0.01）；同一時(shí)點(diǎn)