淡豆豉總異黃酮片制備工藝研究.pdf

1、目的：淡豆豉為常用中藥，具有解表除煩、宣發(fā)郁熱的功效。臨床上常用于感冒、寒熱頭疼，煩躁胸悶，虛煩不眠等證的治療。大豆異黃酮是其中的主要活性成分，具有雌激素樣作用。前期研究表明淡豆豉異黃酮對絕經(jīng)期婦女心血管疾病有一定的治療作用。為進(jìn)一步開發(fā)淡豆豉資源及研制治療絕經(jīng)期婦女心血管疾病的新藥，本研究對淡豆豉異黃酮提取、純化工藝進(jìn)行優(yōu)化，并結(jié)合藥物性質(zhì)制成淡豆豉異黃酮片。
　　 方法：
　　 1.含量測定方法的研究
　　

2、采用紫外分光光度法，建立淡豆豉總異黃酮的含量測定方法，并進(jìn)行了方法學(xué)研究。采用HPLC法，建立染料木素的含量測定方法，并進(jìn)行了方法學(xué)研究。
　　 2.提取、分離、純化工藝研究
　　 以淡豆豉總異黃酮和染料木素為考察指標(biāo)，通過單因素提取溶媒考察，優(yōu)化選出最佳提取溶媒；采用Lg（34）正交試驗設(shè)計優(yōu)選淡豆豉總異黃酮的提取工藝，結(jié)合實際生產(chǎn)情況進(jìn)行提取工藝的驗證試驗，通過驗證試驗，確定淡豆豉總異黃酮的提取工藝。
　　

3、采用大孔吸附樹脂對淡豆豉總異黃酮進(jìn)行分離和純化。采用靜態(tài)分析和動態(tài)分析的方法對不同型號不同廠家的大孔樹脂進(jìn)行篩選，確定適合分離淡豆豉異黃酮的樹脂型號，并對影響大孔樹脂吸附量和洗脫率的各因素：藥液的濃度，上樣速度，最大上樣量，水洗脫用量，洗脫乙醇濃度，洗脫溶劑用量，洗脫速度進(jìn)行了考察，最終確定了大孔吸附樹脂分離純化淡豆豉異黃酮的工藝條件。
　　 3.片劑的成型工藝研究
　　 通過對粘合劑、崩解劑、潤滑劑型號進(jìn)行考察，確定片

4、劑的處方。并且對乙醇濃度（75％，80％，85％，95％）、PVP濃度（1％，3％，5％，10％），羧甲基纖維素鈉，硬脂酸美的用量進(jìn)行考察，最終確定了片劑的成型工藝。
　　 結(jié)果：
　　 1.建立紫外分光光度法測總異黃酮及HPLC測染料木素的含量測定方法
　　 1.1紫外分光光度法測定總異黃酮的含量
　　 對照品溶液的制備：精密稱取染料木素對照品適量，加甲醇制成每1ml含染料木素3.864μg/ml的溶液

5、，即得。
　　 供試品溶液的制備：精密吸取提取液5ml蒸干，用15ml水溶解，用乙酸乙酯萃取6次，每次25ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，用甲醇定容到50ml的量瓶中，既得。
　　 檢測波長的選擇：采用二極管陣列檢測器對供試品溶液和對照品溶液在200nm-700nm之間進(jìn)行光譜掃描，二者在261nm處有最大吸收，確定最大吸收波。
　　 測定法：將對照品溶液和供試品溶液用紫外分光光計進(jìn)行測定，即得。
　　 1.

6、2 HPLC法測定染料木素的含量
　　 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-0.1％冰醋酸水（57：43）為流動相，檢測波長：261nm，流速：1ml/min。理論塔板數(shù)按染料木素峰計算不低于3000。
　　 對照品溶液的制備：精密稱取染料木素對照品適量，加甲醇制成每1ml含染料木素9.92μg/ml，即得。
　　 供試品溶液的制備：將淡豆豉提取液用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得。

7、
　　 測定法：精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
　　 2.提取、分離、純化研究結(jié)果
　　 2.1提取工藝考察結(jié)果
　　 通過單因素考察和正交試驗優(yōu)選出淡豆豉異黃酮的提取工藝為：加8倍量70％乙醇回流提取3次，每次2小時，合并提取液回收乙醇，得濃度為0.1g/ml的溶液。
　　 2.2分離、純化工藝考察結(jié)果
　　 采用靜態(tài)吸附和動態(tài)吸附的方法篩選出HP

8、D500大孔吸附樹脂為純化樹脂，其吸附量和洗脫率均高于其他樹脂。通過考察，HPD500大孔吸附樹脂的純化工藝為：藥液的濃度為0.15g生藥/ml，以4BV/h的流速通過HPD500大孔吸附樹脂，最大吸附量為1.17g生藥/ml樹脂。先以12倍柱體積的水洗脫，繼以15倍柱體積的70％乙醇洗脫，洗脫流速為4BV/h，收集洗脫液，置減壓干燥箱中烘至完全干燥，取出，粉碎成80目粉末。
　　 3.片劑成型工藝研究結(jié)果
　　 通過對

9、片劑成型工藝的研究，初步確定片劑的成型工藝為：取經(jīng)大孔吸附樹脂純化后的淡豆豉異黃酮粉末及輔料淀粉、羧甲基淀粉鈉，用80％乙醇制備的5％的PVP濕法制粒，烘干，用20目的篩網(wǎng)整粒，加入維生素C及適量的硬脂酸美進(jìn)行壓片。經(jīng)該工藝壓制的片劑外觀光滑，為淺棕色，崩解度較好，說明該工藝可行。
　　 結(jié)論：通過對紫外分光光度法測定總異黃酮及HPLC法測定染料木素的方法進(jìn)行方法學(xué)考察，得出該方法穩(wěn)定、可靠，可用于總異黃酮及染料木素的測定。通過