4’-甲醚-黃芩素對耐藥性人絨毛膜癌體內(nèi)逆轉(zhuǎn)作用的研究.pdf

1、為尋找適合臨床應用的新型多藥耐藥(MDR)逆轉(zhuǎn)劑及逆轉(zhuǎn)方法，本課題在前期體外研究的基礎上，構(gòu)建了多藥耐藥性人絨毛膜癌裸鼠移植瘤模型，通過體內(nèi)實驗進一步觀察了馬鞭草抗絨癌有效成分4’-甲醚-黃芩素(4’-M-S)對人絨毛膜癌多藥耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用，并初步探討其作用機理，將中藥抗腫瘤作用及相關(guān)機制的研究提升到動物整體水平。本研究分為兩部分： 一、多藥耐藥性人絨毛膜癌裸鼠移植瘤模型的建立采用皮下接種細胞懸液法，利用耐藥性人絨毛膜癌JAR

2、/VP16細胞系制備裸鼠移植瘤模型。細胞接種后8～10d即陸續(xù)開始成瘤，成瘤率為100％(20/20)，移植瘤生長穩(wěn)定；HE染色光鏡及透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)瘤組織細胞形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)與人絨毛膜癌耐藥細胞系JAR/VP16相似；逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)結(jié)果表明移植瘤組織mdr1 mRNA高表達；流式細胞術(shù)(FCM)檢測結(jié)果提示移植瘤組織對細胞內(nèi)羅丹明123(Rhodaminel23，Rh123)有顯著的外排作用。以上結(jié)果表明，運用此法

3、建立的裸鼠移植瘤模型，與人絨毛膜癌多藥耐藥細胞系JAR/VP16的組織學特性和生物學特點相近，能直觀反映絨癌的生長過程，可作為耐藥性絨癌研究的在體實驗模型。 　　二、4’-甲醚-黃芩素對耐藥性人絨毛膜癌裸鼠移植瘤的耐藥逆轉(zhuǎn)作用依照前述方法建立耐藥性人絨毛膜癌裸鼠移植瘤模型，隨機分為對照組、依托泊苷(VP16)組、4’-M-S組和4’-M-S+VP16組。動態(tài)觀測各組移植瘤的生長情況，發(fā)現(xiàn)4’-M-S與VP16聯(lián)合用藥，可顯著抑制

4、耐藥性人絨毛膜癌裸鼠移植瘤體積的增長，改善荷瘤鼠生存質(zhì)量并延長裸鼠存活時間；光鏡及透射電鏡觀察均表明瘤細胞有早期凋亡的形態(tài)學改變，流式細胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞凋亡率明顯增高；RT-PCR、蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測結(jié)果顯示，瘤組織中mdr1 tuRNA、lrp rnRNA及其編碼的蛋白P-gp和LRP表達均顯著下降。以上結(jié)果說明：4’-M-S能有效逆轉(zhuǎn)裸鼠移植瘤組織對化療藥物VP16的耐受性，其機制可能與4'-M-S誘