4’-甲醚-黃芩素對(duì)耐藥性人絨毛膜癌體內(nèi)逆轉(zhuǎn)作用的研究.pdf

1、為尋找適合臨床應(yīng)用的新型多藥耐藥(MDR)逆轉(zhuǎn)劑及逆轉(zhuǎn)方法，本課題在前期體外研究的基礎(chǔ)上，構(gòu)建了多藥耐藥性人絨毛膜癌裸鼠移植瘤模型，通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步觀察了馬鞭草抗絨癌有效成分4’-甲醚-黃芩素(4’-M-S)對(duì)人絨毛膜癌多藥耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用，并初步探討其作用機(jī)理，將中藥抗腫瘤作用及相關(guān)機(jī)制的研究提升到動(dòng)物整體水平。本研究分為兩部分： 一、多藥耐藥性人絨毛膜癌裸鼠移植瘤模型的建立采用皮下接種細(xì)胞懸液法，利用耐藥性人絨毛膜癌JAR

2、/VP16細(xì)胞系制備裸鼠移植瘤模型。細(xì)胞接種后8～10d即陸續(xù)開始成瘤，成瘤率為100％(20/20)，移植瘤生長(zhǎng)穩(wěn)定；HE染色光鏡及透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)瘤組織細(xì)胞形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)與人絨毛膜癌耐藥細(xì)胞系JAR/VP16相似；逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)結(jié)果表明移植瘤組織mdr1 mRNA高表達(dá)；流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)結(jié)果提示移植瘤組織對(duì)細(xì)胞內(nèi)羅丹明123(Rhodaminel23，Rh123)有顯著的外排作用。以上結(jié)果表明，運(yùn)用此法

3、建立的裸鼠移植瘤模型，與人絨毛膜癌多藥耐藥細(xì)胞系JAR/VP16的組織學(xué)特性和生物學(xué)特點(diǎn)相近，能直觀反映絨癌的生長(zhǎng)過程，可作為耐藥性絨癌研究的在體實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?　　二、4’-甲醚-黃芩素對(duì)耐藥性人絨毛膜癌裸鼠移植瘤的耐藥逆轉(zhuǎn)作用依照前述方法建立耐藥性人絨毛膜癌裸鼠移植瘤模型，隨機(jī)分為對(duì)照組、依托泊苷(VP16)組、4’-M-S組和4’-M-S+VP16組。動(dòng)態(tài)觀測(cè)各組移植瘤的生長(zhǎng)情況，發(fā)現(xiàn)4’-M-S與VP16聯(lián)合用藥，可顯著抑制

4、耐藥性人絨毛膜癌裸鼠移植瘤體積的增長(zhǎng)，改善荷瘤鼠生存質(zhì)量并延長(zhǎng)裸鼠存活時(shí)間；光鏡及透射電鏡觀察均表明瘤細(xì)胞有早期凋亡的形態(tài)學(xué)改變，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞凋亡率明顯增高；RT-PCR、蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)結(jié)果顯示，瘤組織中mdr1 tuRNA、lrp rnRNA及其編碼的蛋白P-gp和LRP表達(dá)均顯著下降。以上結(jié)果說明：4’-M-S能有效逆轉(zhuǎn)裸鼠移植瘤組織對(duì)化療藥物VP16的耐受性，其機(jī)制可能與4'-M-S誘