淀粉型可吸收多聚糖止血粉促骨愈合作用的研究.pdf

1、骨手術(shù)往往造成較大的創(chuàng)面出血，目前尚無確切的止血手段，除手術(shù)輸血外，一般是應(yīng)用骨蠟封閉骨折斷面，但骨蠟本身不被機(jī)體吸收，妨礙骨質(zhì)愈合。最新研制出的止血劑淀粉型可吸收性多聚糖止血粉(Starch-derived Absorbable Polysaccharide Hemostat,SAPH)是較為理想的術(shù)中止血材料，其為一種來源于淀粉的可吸收性多聚糖止血粉，目前已廣泛應(yīng)用于各種外科手術(shù)。SAPH作為一種快速、安全、高效的止血材料，在骨手術(shù)

2、中可以有效地減少出血量，以往臨床和基礎(chǔ)的研究大多是對其止血效果的評價(jià)，但SAPH對骨質(zhì)愈合有無影響、機(jī)制又如何，一直是研究的盲點(diǎn)。本研究將觀察SAPH對骨質(zhì)愈合的影響，初步探討其可能機(jī)制。
　　目的：
　　1、觀察SAPH對家兔顱骨愈合的影響；
　　2、觀察SAPH對成骨細(xì)胞增殖和分化的影響；
　　3、初步探討骨形成蛋白-2(BMP-2)在SAPH促進(jìn)骨質(zhì)愈合中的作用。
　　方法：
　　1、SAPH對

3、家兔顱骨愈合的影響
　　以直徑6mm鉆頭在家兔頂骨開深達(dá)全層的圓形標(biāo)準(zhǔn)缺損，用SAPH或骨蠟止血并填充缺損處。術(shù)后6周，通過骨愈合評分、CT、礦物質(zhì)沉積速率、骨小梁面積等指標(biāo)，觀察SAPH對骨愈合的影響。
　　2、SAPH對成骨細(xì)胞增殖和分化的影響
　　體外培養(yǎng)小鼠顱骨成骨細(xì)胞MC3T3-E1系，通過MTT實(shí)驗(yàn)繪制細(xì)胞生長曲線，以17β-雌二醇為對照，觀察不同濃度或不同作用時(shí)間的SAPH對成骨細(xì)胞增殖的影響；檢測細(xì)胞堿

4、性磷酸酶和培養(yǎng)上清液中的骨鈣素，以反映SAPH對成骨細(xì)胞成熟和分化的影響。
　　3、SAPH對骨組織和成骨細(xì)胞BMP-2蛋白表達(dá)的影響
　　通過免疫組化、Western-blotting的方法，在動物標(biāo)本和細(xì)胞上分別觀察SAPH對于骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2表達(dá)量的影響。
　　結(jié)果：
　　1、家兔顱骨標(biāo)準(zhǔn)化缺損模型建立并處理6周后，SAPH可以明顯降低骨愈合評分（評分越低，愈合越好）；CT片顯示使用SAPH的動物顱骨缺損

5、面積減??；顱骨缺損處邊緣礦物質(zhì)沉積速度增加；麗春紅染色示顱骨鉆孔區(qū)域骨小梁面積增加、有大量骨髓腔形成、缺損區(qū)面積減小。而使用骨蠟的動物，愈合評分高，缺損面積大，鉆孔區(qū)域鮮有骨髓腔和骨小梁形成，甚至出現(xiàn)大片缺如。
　　2、MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，SAPH和17β-雌二醇均可以抬高細(xì)胞生長曲線，17β-雌二醇的作用優(yōu)于SAPH，細(xì)胞增殖在72h時(shí)達(dá)到頂峰；當(dāng)SAPH濃度大于0.1μg/ml時(shí)，增加濃度并不能加速細(xì)胞增殖；反映成骨細(xì)

6、胞成熟和分化的堿性磷酸酶和骨鈣素在SAPH和17β-雌二醇的作用下明顯增加。
　　3、組織和細(xì)胞的免疫組化結(jié)果提示，應(yīng)用SAPH的動物顱骨缺損區(qū)域BMP-2表達(dá)增多；加入SAPH的成骨細(xì)胞胞漿內(nèi)有大量BMP-2的表達(dá)，Western-blotting顯示該蛋白表達(dá)量顯著增加。
　　結(jié)論：
　　1、SAPH能促進(jìn)家兔顱骨的愈合，而骨蠟妨礙骨質(zhì)愈合；
　　2、SAPH可以加速體外培養(yǎng)的成骨細(xì)胞的增殖、成熟和分化；

7、r>　　3、應(yīng)用SAPH可以增加家兔顱骨缺損部位和成骨細(xì)胞BMP-2的表達(dá)，這可能是其促進(jìn)骨質(zhì)愈合的機(jī)制之一。
　　本研究證明了SAPH在發(fā)揮快速、高效止血功能的同時(shí)，還可以促進(jìn)骨質(zhì)愈合，促進(jìn)成骨細(xì)胞成熟分化，促進(jìn)BMP-2表達(dá)，其效果遠(yuǎn)優(yōu)于常用的骨蠟。因此，SAPH可以作為一種安全的骨手術(shù)止血劑，并且有望開發(fā)成為新型的人工骨替代材料。研究還觀察到成骨細(xì)胞能在高濃度的SAPH中能正常生長，說明其具有良好的生物相容性，有進(jìn)一步改良劑