紅花黃色素對(duì)大鼠糖尿病視網(wǎng)膜病變的保護(hù)作用.pdf

1、目的:觀察紅花黃色素(saffloweryellow pigment)對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜組織中的血小板源性生長(zhǎng)因子（platelet derived growth factor, PDGF）和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factors，VEGF)表達(dá)的影響，并初步探討紅花黃色素治療糖尿病性視網(wǎng)膜病變的機(jī)制，為此藥物的臨床應(yīng)用提供更多的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為糖尿病性視網(wǎng)膜病變提供一個(gè)新的治療方案。

2、>　　方法:選取清潔級(jí)的健康雄性SD大鼠60只，體重為(200±20)g。隨機(jī)選取20只正常大鼠作為正常對(duì)照組，剩余的40只大鼠于腹腔內(nèi)一次性注入鏈脲佐菌素溶液(Streptozotocin，STZ)（劑量為50mg/kg）制造糖尿病大鼠模型，然后將動(dòng)物隨機(jī)分為糖尿病組（陽(yáng)性對(duì)照組）20只和紅花黃色素治療組20只。治療組大鼠將紅花黃色素溶液按照每日劑量40mg/kg行腹腔注射，同時(shí)糖尿病組和對(duì)照組同期注射等量的生理鹽水，分別于連續(xù)注射2

3、、4、6、8周后取大鼠雙側(cè)眼球，制備視網(wǎng)膜組織切片，于光鏡下觀察視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(Retinal ganglion cells，RGCs)的形態(tài)學(xué)改變并計(jì)算RGCs的存活數(shù)目。運(yùn)用免疫組織化學(xué)技術(shù)觀察視網(wǎng)膜組織中VEGF及PDGF的表達(dá)情況，同時(shí)運(yùn)用計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)半定量檢測(cè)VEGF及PDGF的平均光密度值（average optical density, AOD）。本實(shí)驗(yàn)的所有數(shù)據(jù)都服從正態(tài)分布，所有的數(shù)據(jù)結(jié)果的表達(dá)采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)

4、差，實(shí)驗(yàn)結(jié)果均采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。同一組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)資料運(yùn)用單因素方差分析(One-way ANOVA)，不同組間同一時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)資料進(jìn)行獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、大鼠的一般生長(zhǎng)情況
　　實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，所有大鼠全部存活。在實(shí)驗(yàn)開始時(shí)測(cè)量三組大鼠的體重?zé)o明顯差異，（P＞0.05）;隨著觀察時(shí)間的延長(zhǎng)，糖尿病組及紅花黃色素組大

5、鼠的體重較正常組明顯降低(P＜0.05)，同時(shí)糖尿病組及紅花黃色素組大鼠的飲食量、飲水量和尿量較正常組增加。
　　2、視網(wǎng)膜組織中HE染色及光鏡檢查結(jié)果
　　2.1 RGCs的形態(tài)學(xué)改變
　　正常組:大鼠視網(wǎng)膜組織的結(jié)構(gòu)由內(nèi)向外的順序依次為:視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、雙極細(xì)胞層、感光細(xì)胞層。正常情況下，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層呈單層排列，排列有序，細(xì)胞密度大，胞核清晰可見(jiàn)，雙極細(xì)胞層和感光細(xì)胞層排列整齊、緊密。糖尿病組:在糖尿病視

6、網(wǎng)膜病變?cè)缙?，部分?xì)胞呈現(xiàn)水腫、空泡樣變，隨著糖尿病視網(wǎng)膜病變的進(jìn)展，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層胞核稀疏、排列混亂、空泡樣變程度較前加強(qiáng)，并出現(xiàn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞壞死現(xiàn)象，雙極細(xì)胞層及感光細(xì)胞層的細(xì)胞也有不同程度的減少。治療組視網(wǎng)膜組織的形態(tài)改變各個(gè)時(shí)段點(diǎn)均強(qiáng)于對(duì)照組。
　　2.2 RGCs的數(shù)量改變
　　正常對(duì)照組每×400倍的光鏡視野中，平均RGCs的數(shù)量在四個(gè)實(shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)均無(wú)明顯差異，依次為:24.297±0.090、24.315

7、±0.381、24.293±0.426、24.581±0.548個(gè);糖尿病組大鼠各時(shí)間點(diǎn)的平均RGCs數(shù)依次為:16.778±1.683、12.172±0.527、8.064±0.761、3.512±0.719個(gè);紅花黃色素治療組大鼠的平均RGCs數(shù)依次為:21.469±0.737、14.678±1.740、9.918±1.073、6.524±0.921個(gè)。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大鼠糖尿病視網(wǎng)膜病變之后RGCs的數(shù)量在糖尿病組及治療組均為

8、下降趨勢(shì)，在各觀察時(shí)間段，治療組的RGCs數(shù)量明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，糖尿病組及治療組在各時(shí)間段RGCs的數(shù)目均低于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　3、視網(wǎng)膜組織中VEGF、PDGF的免疫組織化學(xué)染色及半定量檢測(cè)結(jié)果
　　3.1視網(wǎng)膜組織中VEGF的表達(dá)結(jié)果
　　本實(shí)驗(yàn)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，正常組可見(jiàn)VEGF有極微弱的表達(dá)，且各時(shí)間點(diǎn)之間無(wú)明顯變化;糖尿病組各時(shí)間點(diǎn)VEGF表

9、達(dá)的AOD值分別為:0.262±0.017、0.341±0.018、0.382±0.017、0.422±0.025;治療組為:0.241±0.019、0.309±0.019、0.357±0.023、0.375±0.026。因此，糖尿病組第2周時(shí)可見(jiàn)VEGF的陽(yáng)性表達(dá)，且隨著觀察時(shí)間地延長(zhǎng)，陽(yáng)性表達(dá)率更高，(P＜0.05);相同時(shí)間段治療組的VEGF陽(yáng)性表達(dá)均低于糖尿病組，而且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.2 PDGF

10、在視網(wǎng)膜中的表達(dá)
　　正常組大鼠視網(wǎng)膜組織可見(jiàn)PDGF的極微弱的表達(dá)，各時(shí)間點(diǎn)之間無(wú)明顯變化;糖尿病組2、4、6、8周時(shí)PDGF表達(dá)的AOD值分別為:0.116±0.016、0.194±0.015、0.244±0.025、0.264±0.019;治療組分別為:0.089±0.015、0.168±0.019、0.211±0.019、0.234±0.019。因此，糖尿病組2周時(shí)可見(jiàn)PDGF的陽(yáng)性表達(dá)，且隨著觀察時(shí)間的延長(zhǎng)，陽(yáng)性表達(dá)率更