AMI大鼠血管內(nèi)皮功能和ERK-CREB信號通路的改變以及奧美沙坦酯的干預(yù).pdf

1、目的：通過急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）大鼠模型觀察奧美沙坦酯對血壓（blood pressure，BP）、離體胸主動脈內(nèi)皮舒縮功能、外周血血管緊張素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）和一氧化氮（nitrous oxide，NO）含量、一氧化氮合酶（nitric oxide synthase，NOS）活性、心肌梗死面積、心肌胞外信號調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-

2、regulated kinase，ERK）mRNA和cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（cAMP response element binding protein，CREB）mRNA表達(dá)的影響效應(yīng)，旨在研究AMI后大鼠血管內(nèi)皮功能的變化與ERK/CREB信號通路的改變以及奧美沙坦酯的干預(yù)。 方法：（1）大鼠心肌梗死模型建立和實驗分組：結(jié)扎Sprague-Dawley（SD）大鼠冠狀動脈左前降支建立AMI模型，將術(shù)后24小時（hour，h）

3、存活的24只大鼠隨機分為三組：急性心肌梗死組（AMI組）（n=8）；奧美沙坦酯低劑量（olmesartan medoxomil low dose，OML）組（n=8），給藥劑量為Img/kg/d；奧美沙坦酯高劑量（olmesartan medoxomil high dose，OMH）組（n=8），給藥劑量為3mg/kg/d。共給藥2周。另設(shè)一假手術(shù)（sham operation，Sham）組（n=7）。將奧美沙坦酯研碎溶于助溶劑配成藥液

4、，術(shù)后24h開始一天一次灌胃，Sham組及AMI組均以同樣方法喂予等體積助溶劑。（2）觀察指標(biāo)：①尾動脈血壓：分別于術(shù)前、術(shù)后24h（灌胃前）、1周（week，w）、2w測量；②血清NO含量及NOS活性：術(shù)后2w經(jīng)眼眶后靜脈叢取外周血，采用硝酸還原酶法測定；③血漿AngⅡ含量：術(shù)后2w取外周血方法同前，采用放射免疫法測定；④離體胸主動脈條片內(nèi)皮舒縮功能：術(shù)后2W處死動物，取胸主動脈制成條片行離體器官灌流實驗，測定其對去氧腎上腺素（phe

5、nylephrine，PE）的收縮反應(yīng)、對乙酰膽堿（acetylcholine，Ach）的內(nèi)皮依賴性舒張（endothelium-dependent diastole，EDD）反應(yīng)和對硝普鈉（sodium nitroprusside，SNP）的非內(nèi)皮依賴性舒張（non-endothelium-dependent diastole，NEDD）反應(yīng)；⑤心臟組織病理改變及心肌梗死面積測算：處死動物后做左室橫切面石蠟切片，通過HE染色測算心臟瘢

6、痕長度占左室總周長的百分比，以此百分比代表心肌梗死面積；⑥心肌ERK和CREB的mRNA表達(dá)：采用逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcriptase-polymerase chain reaction，RT-PCR）法半定量檢測。 結(jié)果：（1）尾動脈收縮壓：在術(shù)前、術(shù)后24h、1w及2w各組大鼠尾動脈收縮壓之間無明顯差異。（2）血清NO含量及NOS活性：與Sham組相比，AMI組血清NO含量和NOS活性均明顯降低，

7、差異有顯著性；與AMI組相比，OML組和OMH組NO含量和NOS活性均明顯升高，達(dá)到Sham組水平，OMH組NO含量和NOS活性較OML組高，但差異無顯著性。（3）血漿AngⅡ含量：與Sham組比較，AMI組、OML組和OMH組血漿AngⅡ含量均增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與AMI組比較，OML組無顯著性差異；OMH組血漿AngⅡ水平較AMI組與OMH組明顯增高，均為p<0.05。（4）離體胸主動脈條片內(nèi)皮舒縮功能：與Sham組比較，AMI

8、組EDD功能顯著受損，P<0.05；經(jīng)奧美沙坦酯干預(yù)后，胸主動脈EDD功能明顯改善，兩奧美沙坦酯治療組與AMI組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義；OMH組似能更好地改善EDD功能，但與OML組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。而各組對PE的收縮反應(yīng)和對SNP的NEDD反應(yīng)比較，均為P>0.05；（5）心臟HE染色及心肌梗死面積：Sham組心肌HE染色正常；AMI組及奧美沙坦酯干預(yù)組梗死區(qū)均可見心肌纖維溶解斷裂，大量炎性細(xì)胞、成纖維細(xì)胞浸潤，瘢痕組織形成，非梗死

9、區(qū)心肌纖維排列整齊；奧美沙坦酯呈劑量依賴性縮小心肌梗死面積；（6）心肌ERKmRNA及CREBmRNA表達(dá)：在Sham組ERKmRNA和CREBmRNA表達(dá)低；在AMI組其表達(dá)明顯增加；奧美沙坦酯呈劑量依賴性降低該表達(dá)。 結(jié)論：（1）AMI后兩周SD大鼠血管內(nèi)皮功能即顯著性減退；（2）AMI后血中AngⅡ水平增加，伴隨心肌ERKmRNA和CREBmRNA表達(dá)水平增高，提示AMI后ED的發(fā)生可能與AngⅡ經(jīng)血管緊張素Ⅱ1型受（an