β3-AR在心衰大鼠心肌重構(gòu)中介導(dǎo)能量代謝的相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　采用腹主動脈縮窄法制備壓力負(fù)荷型心力衰竭大鼠模型，分別應(yīng)用選擇性β3-AR抑制劑及激動劑進(jìn)行干預(yù)：1）觀察β3-AR調(diào)節(jié)后在心衰進(jìn)展中對對心功能及能量代謝的影響；2）探討β3-AR在心衰大鼠心肌重構(gòu)中介導(dǎo)能量代謝的相關(guān)機(jī)制。
　　方法：
　　1)采用改良腹主動脈縮窄法建立慢性心衰大鼠模型：將大鼠隨機(jī)分為5組：正常對照組（15只）；手術(shù)組（心衰組，20只）；假手術(shù)組（15只），β3-AR激動劑組（BRL組，2

2、0只）；β3-AR抑制劑組（SR組，20只）。其中正常對照組給予常規(guī)飼養(yǎng)，不做特殊處理。手術(shù)組、BRL組、SR組給予改良腹主動脈縮窄手術(shù)。喂養(yǎng)8周后給予干預(yù)：（1）正常組和假手術(shù)組不予特殊處理；（2）手術(shù)組：尾靜脈注射生理鹽水，1 ml/kg體重，每周2次，共4周；（3）BRL組：靜脈注射BRL37344，0.4nmol/kg·min，10min，每周2次，連續(xù)4周；（4）SR組：腹腔注射SR59230A，80nmol/ml,1ml，每

3、周2次，連續(xù)4周。分別于干預(yù)結(jié)束后及干預(yù)結(jié)束4周后進(jìn)行其他相關(guān)指標(biāo)的檢測。
　　2)分別于12、16周應(yīng)用超聲心動圖、左心導(dǎo)管技術(shù)檢測大鼠心功能及血流動力學(xué)指標(biāo)；
　　3) HE染色觀察各組大鼠心肌形態(tài)學(xué)變化，免疫組化觀察各組大鼠心肌組織β3-AR、PPARα、ERK2、AMPKα2、UCP2蛋白表達(dá)定位；
　　4)試劑盒檢測各組大鼠心肌組織FFA、葡萄糖、乳酸、丙酮含量，ATP酶活性；
　　5) RT-PCR技

4、術(shù)檢測各組大鼠心肌組織β3-AR、PPARα、ERK2、AMPKα2、UCP2 mRNA表達(dá)；
　　6) Western Blotting技術(shù)檢測各組大鼠心肌組織β3-AR及PPARα蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1)超聲心動圖結(jié)果顯示：與正常對照組比較，假手術(shù)組各項(xiàng)指標(biāo)均沒有明顯變化。12周組大鼠與正常組比較，心衰組、BRL組、SR組LVIDD、LVIDS、IVSD、IVSS均增高，F(xiàn)S、EF減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

5、<0.05)，與心衰組比較，正常對照組各項(xiàng)指標(biāo)均有差異（P<0.05)，SR組除IVSS、IVSD無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其余各項(xiàng)指標(biāo)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05)，BRL組各項(xiàng)指標(biāo)均較心衰組有差異（P<0.05)。16周組大鼠與正常組比較，心衰組、BRL組、SR組LVIDD、LVIDS、IVSD、IVSS均增高，F(xiàn)S、EF減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)，與心衰組比較，正常對照組各項(xiàng)指標(biāo)均有差異（P<0.05)，SR組除IVSS無差異，

6、其余各項(xiàng)指標(biāo)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05)，BRL組各項(xiàng)指標(biāo)均較心衰組有差異（P<0.05)。
　　2)血流動力學(xué)結(jié)果顯示：血流動力學(xué)檢查結(jié)果顯示:與正常對照組比較，假手術(shù)組各項(xiàng)指標(biāo)均沒有明顯變化，心衰組、BRL組、SR組HR、LVSP、±dp/dtmax均降低，LVEDP增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)。與12周心衰組比較，正常對照組各項(xiàng)指標(biāo)均有差異（P<0.05)，SR組及BRL組心率較心衰組無明顯差異，BRL組 LVS

7、P、±dp/dtmax、LVEDP較心衰組有差異（P<0.05)；SR組只有-dp/dtmax和LVEDP較心衰組有差異（P<0.05)。與16周心衰組比較，正常對照組各項(xiàng)指標(biāo)均有差異（P<0.05)，BRL組心率較心衰組有差異，BRL組及SR組LVSP、±dp/dtmax、LVEDP均較心衰組有差異（P<0.05)。
　　3) HE染色鏡下觀察發(fā)現(xiàn)：假手術(shù)組較正常組無明顯變化，心衰組、BRL組大鼠心肌均出現(xiàn)心肌細(xì)胞變性、萎縮，可

8、見局灶性壞死，心肌纖維排列疏松、紊亂，甚至出現(xiàn)斷裂，間質(zhì)有炎細(xì)胞浸潤，BRL組更為明顯，SR組變化較心衰組輕。免疫組化結(jié)果示：正常組及假手術(shù)組大鼠心肌組織中β3-AR、PPARα、ERK2、AMPKα2、UCP2蛋白表達(dá)量無明顯差異，心衰組、BRL組β3-AR、ERK2、UCP2蛋白表達(dá)量較正常組增加，BRL組增加更明顯，心衰組、BRL組PPARα、AMPKα2表達(dá)量較正常組降低，BRL組降低更明顯；SR組β3-AR、ERK2、UCP2

9、表達(dá)量較心衰組低，較正常組增加，SR組PPARα、AMPKα2表達(dá)量較心衰組增加，但較正常組低，16周組上述變化較12周組更明顯。
　　4)心肌組織FFA、葡萄糖、乳酸、丙酮含量，ATP酶活性檢測結(jié)果：與正常組比較：假手術(shù)組心肌組織游離脂肪酸、葡萄糖、乳酸、丙酮酸含量，ATP酶活力均較正常組無差異（P>0.05），心衰組、BRL組大鼠心肌組織游離脂肪酸、乳酸、丙酮酸含量均較正常組明顯升高（P<0.05或P<0.01），葡萄糖含量、

10、Na+K+-ATPase、Ca2+Mg2+-ATPase活性均較正常組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或 P<0.01），SR組心肌組織游離脂肪酸、乳酸、丙酮酸含量較心衰組降低，Na+K+-ATPase、Ca2+Mg2+-ATPase活性較心衰組升高。
　　5) RT-PCR結(jié)果：假手術(shù)組心肌組織β3-AR、PPARα、AMPKα2、UCP2、ERK2的mRNA含量較正常組無明顯差異（P>0.05）；12周心衰組、BRL組、S

11、R組β3-AR、PPARα、AMPKα2mRNA表達(dá)量較正常組明顯升高（P<0.05）；16周組較12周組更明顯（P<0.05），BRL組β3-AR、PPARα、AMPKα2 mRNA表達(dá)量較心衰組有差異（P<0.05）。12周心衰組、BRL組PPARα、AMPKα2 mRNA表達(dá)量較正常組降低（P<0.05），16周組較12周組明顯（P<0.05）。12周心衰組、BRL組β3-AR、UCP2、ERK2 mRNA表達(dá)量較正常組明顯降低（

12、P<0.05）；16周組較12周組更明顯（P<0.05），BRL組UCP2、ERK2 mRNA表達(dá)量較心衰組有差異（P<0.05）。
　　6) Western Blotting結(jié)果：假手術(shù)組心肌β3-AR、PPARα蛋白含量較正常組無明顯差異（P>0.05）；12周心衰組、BRL組、SR組β3-AR蛋白表達(dá)量（2.01±0.01，2.35±0.06，1.96±0.03）較正常組明顯升高（P<0.05）；16周組較12周組更明顯（P

13、<0.05），BRL組β3-AR蛋白表達(dá)量較心衰組有差異（P<0.05）。12周心衰組、BRL組PPARα蛋白表達(dá)量（1.08±0.05，0.88±0.03）較正常組降低（P<0.05），16周組較12周組明顯（P<0.05）。BRL組、SR組PPARα蛋白表達(dá)量較心衰組有差異（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1)β3-AR激活后可能通過促進(jìn)能量代謝重構(gòu)，惡化心功能，促進(jìn)心室重構(gòu)等機(jī)制參與心衰進(jìn)展；
　　2)β3-A