判斷新生兒缺氧缺血性腦病損傷程度和預(yù)后的早期生化指標(biāo).pdf

1、研究目的： 研究缺氧缺血性腦病新生兒血清中神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)的表達(dá)及其在判斷病情及預(yù)后的價(jià)值；研究血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、色素上皮衍生因子(PEDF)在缺氧缺血性腦病新生兒血中的動(dòng)態(tài)變化，以推測(cè)它們?cè)谀X損傷轉(zhuǎn)歸中的意義。 方法： 1.將60例缺氧缺血性腦病新生兒依據(jù)臨床癥狀分為輕度HIE組、中度HIE組及重度HIE組，各組分別為20例，另分別選擇無(wú)窒息史及其它神經(jīng)系統(tǒng)疾病的新生兒20例作對(duì)照組。

2、均于生后24h內(nèi)、第3天、第7天抽血，用酶聯(lián)免疫雙抗夾心法測(cè)定血清中神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)。 2.將所有檢測(cè)過(guò)神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)的足月兒于生后6個(gè)月進(jìn)行隨訪，行PDMS-2測(cè)試。 3.對(duì)照組、輕度HIE組、中度HIE組、重度HIE組共80例，于生后24h內(nèi)、第3天、第7天抽血，離心后留取血清，用ELISA方法測(cè)血清中的VEGF和PEDF；剩下的血細(xì)胞，先用淋巴細(xì)胞分離液提取淋巴細(xì)胞，然后加入Trizo

3、l液，放于-70℃保存，行定性PCR檢測(cè)VEGF和PEDF的表達(dá)情況。 4.RT-PCR檢測(cè)：采用兩步法進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)。第一步反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，反應(yīng)條件為37℃15min→85℃5sec：人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)上游引物的序列為：5，-GAGTGGTTGACCTTCCTCCA-3’；下游引物的序列為：5’-GGGCAGAGCTGAGTGTTAGC-3’；人色素上皮衍生因子(PEDF)上游引物的序列為：5’-AAGAACCT

4、CAAGAGTGCCTCCC-3’；下游引物的序列為：5’-GCTGAGATCTGAATCCAAGCCA-3’。第二步為RT-PCR反應(yīng)，反應(yīng)條件為：95℃10sec→40×(95℃5sec，60℃30sec)。擴(kuò)增產(chǎn)物在2％瓊脂糖凝膠中電泳。 結(jié)果： 1.對(duì)于血清中的NSE水平，依據(jù)臨床癥狀分度，各HIE程度組間比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=351.007，P=0.000)；由高到低排列為：重度HIE組(均數(shù)為79.9

5、53)，中度HIE組(均數(shù)為51.615)，對(duì)照組(均數(shù)為38.915)，輕度HIE組(均數(shù)為38.520)；各程度組間兩兩比較，除對(duì)照組與輕度HIE組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外(P=0.789)，其余各組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。血清中的NSE水平在三個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=351.007，P=0.000)；由高到低排列為：24h內(nèi)(均數(shù)為65.669)，出生第3天(均數(shù)為50.376)，出生第7天(均

6、數(shù)為40.708)；其中，各時(shí)間點(diǎn)兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。時(shí)間與HIE程度之間交互作用有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=72.295，P=0.000)。各程度組于出生24h內(nèi)比較，除對(duì)照組與輕度HIE組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外(P=0.670)，其余各程度組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。各程度組于出生第3天比較，除對(duì)照組與輕度HIE組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外(P=0.716)，其余各程度組間兩兩比較，差異均有

7、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。各程度組于出生第7天比較，對(duì)照組與輕度HIE組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.716)，對(duì)照組與中度HIE組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.967)，輕度HIE組與中度HIE組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.565)，其余各程度組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。對(duì)照組、輕度HIE組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。中度HIE組、重度HIE組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

8、義(P=0.000)，其中，各時(shí)間點(diǎn)兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。中度HIE組、重度HIE組患兒血清中NSE水平在出生24h內(nèi)最高，逐漸下降，中度HIE組于出生第7天可下降到與對(duì)照組和輕度HIE組相仿水平。對(duì)照組與輕度HIE組，血清中的NSE水平變化不大。 2.預(yù)后與出生時(shí)的臨床癥狀有關(guān)，臨床癥狀越重，預(yù)后越差。運(yùn)動(dòng)商數(shù)于各程度組間兩兩比較，除對(duì)照組與輕度HIE組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，其余各組

9、兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。血清中NSE水平越高，患兒預(yù)后越差，預(yù)后各組間的NSE水平差異有顯著性(F=41.336，P=0.000)；其中，預(yù)后優(yōu)秀的NSE水平(均數(shù)49.0354)、中等(均數(shù)62.4848)、差(均數(shù)75.8833)。各組分別比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。預(yù)后各組血清中的NSE水平與各時(shí)間段之間存在著交互效應(yīng)(F=11.737，P=0.000)。3個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)，血清中NSE水平差異有統(tǒng)

10、計(jì)學(xué)意義(F=78.561，P=0.000)。預(yù)后各組內(nèi)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。各時(shí)間點(diǎn)的預(yù)后各組間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，除24h內(nèi)，中等組與差組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外(P>0.05)，余兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。血清中NSE水平下降越慢，預(yù)后越差。 3.對(duì)于血清中PEDF水平，不同程度的HIE組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=293.609，P=0.000)；由高到低分別為：輕度H

11、IE組(均數(shù)為3.743)，對(duì)照組(均數(shù)為3.735)，重度HIE組(均數(shù)為2.081)，中度HIE組(均數(shù)為1.991)；其中，除對(duì)照組與輕度HIE組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.922)；中度HIE組與重度HIE組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.268)；其余各組之間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。不同時(shí)間點(diǎn)之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=7.328，P=0.001)；由高到低分別為：出生第3天(均數(shù)為3.122)，出生

12、24h內(nèi)(均數(shù)為2.787)，出生第7天(均數(shù)為2.753)；其中，除出生24h內(nèi)與出生第7天比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外(P=0.733)，出生24h內(nèi)與出生第3天比較、出生第3天與出生第7天比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。時(shí)間與HIE程度組之間交互作用有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=2.210，P=0.045)。各程度組于出生24h內(nèi)比較，除對(duì)照組與輕度HIE組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.828)；中度HIE組與重度HIE組比較，差異無(wú)

13、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.721)；其余各程度組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。各程度組于出生第3天比較，除對(duì)照組與輕度HIE組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.697)；中度HIE組與重度HIE組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.613)；其余各程度組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。各程度組于出生第7天比較，除對(duì)照組與輕度HIE組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.637)；中度HIE組與重度HIE組比較，差異無(wú)

14、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.262)；其余各程度組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。對(duì)照組和輕度HIE組于各時(shí)間點(diǎn)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。中度HIE組和重度HIE組于各時(shí)間點(diǎn)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)，其中，除中度HIE組的出生24h內(nèi)與第7天比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.076)，重度HIE組出生24h內(nèi)與第7天比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.718)，其余各時(shí)間點(diǎn)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

15、 4.血清中的VEGF水平，不同程度的HIE分度血清中VEGF水平間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.467，P=0.707)。不同時(shí)間點(diǎn)的PEDF水平之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.995，P=0.372)。血清中VEGF水平，HIE程度與時(shí)間的交互效應(yīng)不顯著(F=1.047，P=0.397)。 結(jié)論： 1.血清中NSE含量及其變化與HIE患兒腦損傷程度有關(guān)，腦損傷程度越重，其血清中NSE含量越高，輕度HIE組血清中

16、NSE水平升高不明顯，中度HIE組進(jìn)一步升高，重度HIE組升高最顯著。血清中NSE含量與時(shí)間段有關(guān)，高峰值在24h內(nèi)，然后下降，中度HIE組于生后第7天，降至與對(duì)照組相似。 2.出生時(shí)，HIE臨床癥狀越重，患兒預(yù)后越不好；出生時(shí)血清中NSE水平越高，患兒預(yù)后不良的機(jī)會(huì)越大；血清中NSE水平下降越慢，預(yù)后越差。 3.臨床癥狀重，血清中的PEDF水平越低；血清中PEDF水平在各時(shí)間點(diǎn)不同，以第3天為高，24h內(nèi)、第7天基本相