缺氧對(duì)二價(jià)金屬轉(zhuǎn)運(yùn)體（DMT1）表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究不同的缺氧方法對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞二價(jià)金屬轉(zhuǎn)運(yùn)體(Divalentmetaltransporter1，DMTl)表達(dá)的影響，初步探討低氧誘導(dǎo)因子1(Hypoxiainduciblefactor-1,HIF.1)與DMTl兩種異構(gòu)體(+IREDMTl和-IREDMTl)之間的關(guān)系。 方法：用COCl2誘導(dǎo)PCI2細(xì)胞及HepG2細(xì)胞缺氧，檢測(cè)DMTl的表達(dá)，確定對(duì)COCl2缺氧敏感的細(xì)胞株。在此基礎(chǔ)上用WesternBlot法檢測(cè)

2、低氧(1％02)及呼吸鏈抑制劑疊氮鈉(NaN3)和魚藤酮(Rotenone)對(duì)該細(xì)胞株HIF.1Q及DMTl表達(dá)的影響，用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)低氧(1％02)對(duì)HIF.1α及DMTl在該細(xì)胞內(nèi)分布的影響。 結(jié)果： 1.用不同濃度的CoCl2(0.025mM、0.05mM、0.125mM、0.25mM、0.5mM、1mM)處理PCI2細(xì)胞4小時(shí)后，其+IREDMTl的表達(dá)量與未用COCl2處理時(shí)相比，均無明顯改變。

3、2.HepG2細(xì)胞在經(jīng)過不同濃度的COCl2處理4小時(shí)后，隨著COCl2濃度的增加，HIF.1Q及DMTl的兩種異構(gòu)體的表達(dá)均逐漸增加。當(dāng)COCl2濃度為lmm時(shí)HIF.1Q表達(dá)量最大，在COCl2濃度為0.5mM時(shí)+IREDMTl和.IREDMTl的表達(dá)量達(dá)到最高值。 3.HepG2細(xì)胞HIF.1Q在低氧(1％02)處理1小時(shí)開始即有表達(dá)，3小時(shí)至6小時(shí)其表達(dá)量達(dá)到高峰。+IREDMTl在低氧處理1小時(shí)也有增加，6小時(shí)達(dá)到最高

4、峰。.IREDMTl在低氧3小時(shí)開始表達(dá)有明顯增加，6小時(shí)達(dá)到最高并持續(xù)至12小時(shí)處。 4.HepG2細(xì)胞HIF.1Q在低氧6小時(shí)有明顯表達(dá)，復(fù)氧24小時(shí)后，HIF.1Q被降解。復(fù)氧24小時(shí)后，+IREDMTl的表達(dá)也明顯少于單純低氧6小時(shí)的表達(dá)量，而-IREDMTl的表達(dá)量卻無明顯改變。 5.HepG2細(xì)胞用NaN3處理1小時(shí)后，DMTl的兩種異構(gòu)體在NaN3濃度為10mM及20mM時(shí)，其表達(dá)量均比對(duì)照組明顯增加；用r

5、otenone處理24小時(shí)后，+IREDMTl在rotenone濃度為20ltm時(shí)，其表達(dá)量與對(duì)照組相比有明顯的增加，.IREDMTl在rotenone濃度為1μM及20μM時(shí)，其表達(dá)量與對(duì)照組相比均無明顯改變；NaN3和rotenone都不能使HepG2細(xì)胞HIF.1Q明顯表達(dá)。 6.在常氧環(huán)境中，DMTl兩種異構(gòu)體在HepG2細(xì)胞胞漿及胞核中均勻分布，HIF.1Q無明顯表達(dá)。低氧(1％02)可使+IREDMTl聚集于胞漿及核

6、膜上，而原本位于胞漿中的-IREDMTl更趨向于胞膜，胞核中的-IREDMTl也有向核膜集中的趨勢(shì)，但不如+IREDMTl明顯，HIF.1Q則在細(xì)胞核中大量表達(dá)。 結(jié)論： 1.COCl2和低氧(1％02)可使HepG2細(xì)胞的HIF.1Q蓄積和DMTl兩種異構(gòu)體的表達(dá)增加，并且三者的變化趨勢(shì)基本一致，提示DMTl的表達(dá)可能受到HIF.1的調(diào)控，DMTl可能是HIF.1的下游基因。 2.NaN3和rotenone雖不