鞘磷脂合成酶(SMS)異常表達對Caco-2細胞中藥物轉(zhuǎn)運體表達和功能的影響.pdf

1、鞘磷脂合成酶SMS(Sphingomyelin synthase)是哺乳動物鞘磷脂(Sphingomyelin，SM)生物合成途徑中的最后一個酶，它主要有SMS1和SMS2兩個亞型，其中SMS1位于在順面高爾基體上，SMS2主要位于細胞膜上。SMS與質(zhì)膜結(jié)構(gòu)、功能以及膜蛋白的表達與定位密切相關(guān)。藥物轉(zhuǎn)運體，是一個特殊的膜蛋白家族，在藥物代謝中發(fā)揮重要作用，其異常表達與一些疾病的發(fā)生有關(guān)。SMS是否影響藥物轉(zhuǎn)運體的表達與功能，通過怎樣的分

2、子機制，是我們關(guān)注的課題。我們以人類結(jié)腸癌細胞Caco-2(colon cancer cell)為對象，分別采用基因下調(diào)和過表達的方式，輔以RT-PCR，western blot和HPLC等手段，研究SMS對藥物轉(zhuǎn)運體的表達與功能的影響。首先，我們用siRNA干擾Caco-2細胞中SMS1或SMS2的表達，發(fā)現(xiàn)P-gp和MRP2的mRNA和蛋白水平的表達明顯降低，并且它們的功能也出現(xiàn)相應下調(diào)，而其它藥物轉(zhuǎn)運蛋白的表達則沒有明顯變化。其次

3、，我們構(gòu)建了穩(wěn)定過表達SMS1的Caco-2細胞株，發(fā)現(xiàn)SMS1的過表達引起P-gp和MRP2表達的顯著增加，調(diào)控二者表達的核受體轉(zhuǎn)錄因子hPXR的mRNA水平的顯著升高，以及參與hPXR調(diào)控的信號通路JAK-2(janus proteintyrosine kinase2)、ERK(extracellular signal regulated kinases)的磷酸化水平的上調(diào)。推測，在SMS1過表達的Caco-2細胞中，p-ERK，p