RAGE基因啟動區(qū)-374T-A多態(tài)性與中國人冠心病、原發(fā)性高血壓的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景和目的: 晚期糖基化終產(chǎn)物受體(receptor for advanced glycation end products，RAGE)基因位于染色體6p21.3，編碼400多個氨基酸(牛416，人404)，是一完整的膜蛋白，分子量為35kD。氨基酸系列分析表明，RAGE為免疫球蛋白超家族的新成員。RAGE在體內(nèi)分布非常廣泛，可在多種細(xì)胞表面上表達。RAGE的配體有晚期糖基化終產(chǎn)物(advanced glycation en

2、d products，AGEs)、β淀粉樣蛋白(amyloid-β protein，Aβ)、神經(jīng)軸突生長因子、S100/鈣粒蛋白及甲狀腺運載蛋白等。越來越多的生物學(xué)證據(jù)表明，RAGE可以通過獨特機制啟動或加速動脈粥樣硬化損傷。 RAGE基因啟動區(qū)存在-374T/A多態(tài)性；-374T/A的置換阻斷了一系列CTF/NF1轉(zhuǎn)錄因子對RAGE基因啟動區(qū)的結(jié)合，對其轉(zhuǎn)錄活性產(chǎn)生明顯的影響。國外有關(guān)RAGE基因-374T/A多態(tài)性與冠心病關(guān)

3、系研究的結(jié)論不甚一致，部分研究認(rèn)為AA基因型冠心病患者病變的血管支數(shù)明顯少于TA基因型和TT基因型患者，認(rèn)為A/A基因型對糖尿病和正常血糖CAD患者的心血管病變起著保護作用；但亦有作者的研究發(fā)現(xiàn)，在糖尿病及正常血糖患者中RAGE基因-374T/A多態(tài)性不是冠心病的危險因素。另外，也有研究發(fā)現(xiàn)AGEs通過RAGE-ERK1/2 MAPK途徑誘導(dǎo)糜蛋白酶的表達，進而導(dǎo)致糜蛋白酶依賴的血管緊張素Ⅱ的生成，提示RAGE可能在高血壓的發(fā)病過程中起

4、著重要的作用。 本研究擬通過對RAGE基因啟動區(qū)-374T/A多態(tài)性的研究，觀察RAGE基因啟動區(qū)-374T/A多態(tài)在中國漢族冠心病人群和對照組人群中的分布特點，并比較兩者之間的差異，分析RAGE基因啟動區(qū)-374T/A多態(tài)性與冠心病及原發(fā)性高血壓的相關(guān)性。 研究對象與方法: 1.研究對象 1.1病例組：入選標(biāo)準(zhǔn)：①冠狀動脈造影證實任何一支血管內(nèi)徑最狹窄≥50﹪；②急性心肌梗死；③陳舊性心肌梗死。共有12

5、7例，其中男性79例，女性48例，平均年齡(歲)65.24±11.34。 1.2對照組：入選標(biāo)準(zhǔn)：①冠狀動脈造影證實無冠狀動脈狹窄；②無冠心病相關(guān)的臨床癥狀；ECG、運動平板試驗、LJCG均正常的其他疾病住院患者或健康體檢者。共有88例，其中男性44例，女性44例，平均年齡(歲)62.67±10.01。 1.3亞組研究 1、糖尿病診斷以1999年WHO的糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，或既往明確診斷為2型糖尿病，正在應(yīng)用口服降糖

6、藥物或接受胰島素治療者。剔除糖尿病患者，分為非糖尿病冠心病組和非糖尿病對照組。 2、以冠心病發(fā)生時男性55歲，女性65歲為界，劃分為早發(fā)冠心病組和晚發(fā)冠心病組。 3、按病變累及左前降支、左回旋支、右冠狀動脈的支數(shù)(顯著累及左主干計為兩支)，分為1支病變組、2支病變組和3支病變組。 4、根據(jù)2004年中國高血壓防治指南的診斷標(biāo)準(zhǔn)，排除繼發(fā)性高血壓，分為原發(fā)性高血壓組和正常血.壓絹。 2.研究方法 2

7、.1收集外周靜脈血標(biāo)本(EDTA抗凝)，離心分離血漿和全血細(xì)胞，均存放于-20℃冰箱內(nèi)保存。 2.2臨床相關(guān)資料的采集與判斷 (1)年齡：按身份證記錄的實足年齡計。 (2)血壓的測量及原發(fā)性高血壓的診斷標(biāo)準(zhǔn)：應(yīng)用臺式水銀血壓計，測量臥位上肢血壓，以Korotokoff法第一音和第五音定義為收縮壓和舒張壓。 (3)吸煙史：平均每日吸煙≥1支，且近一年內(nèi)有吸煙者記為吸煙史陽性。 (4)血漿TC、LDL

8、-C、HDL-C、TG水平：采用日本HATACHI-7600全自動生化分析儀進行測定。以患者住院過程中首次生化報告結(jié)果為準(zhǔn)，記錄TC、LDL-C、HDL-C、TG數(shù)值。 2.3全血基因組DNA提取：使用血細(xì)胞基因組純化試劑盒(Takara)提取基因組DNA。 2.4統(tǒng)計處理計算多態(tài)性基因型頻率，確認(rèn)符合Hardy-Weinberg平衡，計算等位基因頻率。計量資料以x±S表示，比較采用t檢驗和Fisher's exact

9、test，計數(shù)資料比較采用x<'2>檢驗，兩組間基因型頻率及等位基因頻率分布比較采用x<'2>檢驗?；蛐团c冠心病、原發(fā)性高血壓的相關(guān)性比較，采用單因素logistic回歸分析。全部數(shù)據(jù)用SAS 8.1統(tǒng)計分析軟件處理。 結(jié)果: 1.Hardy-Weinberg平衡冠心病組與對照組的RAGE基因-374T/A多態(tài)性進行Hardy-Weinberg平衡檢驗，結(jié)果p=0.134232。說明群體基因遺傳平衡來自同一孟德爾群體。

10、 2.冠心病組與對照組的RAGE基因-374T/A多態(tài)性等位基因頻率和基因型頻率兩組的男女比例、年齡構(gòu)成、糖尿病患病率均未見明顯差異(p>0.05)。冠心病組高血壓患病率和吸煙比例均明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。兩組均可見TT、TA和AA基因型。兩組RAGE基因-374T/A多態(tài)性等位基因頻率和基因型頻率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.9160和p=0.9927)。單因素logistic回歸分析提示，AA基因型與冠心病無關(guān)聯(lián)(O

11、R=0.921，95﹪CI[0.201，4.220]，p=0.9155)。 3.非糖尿病冠心病組與非糖尿病對照組RAGE基因-374T/A多態(tài)性等位基因頻率和基因型頻率兩組的男女構(gòu)成、年齡和吸煙人數(shù)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)，而非糖尿病冠心病組的高血壓患病率明顯多于非糖尿病對照組(p=0.0182)。兩組均可見TT、TA、AA基因型，但兩組RAGE基因-374T/A多態(tài)性等位基因頻率和基因型頻率的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p=

12、0.5828和p=0.3084)。單因素logistic回歸分析提示，AA基因型與非糖尿病冠心病無關(guān)聯(lián)(OR=1.415，95﹪CI[0.253，7.926]，p=0.6929)。 4.早發(fā)冠心病組與晚發(fā)冠心病組RAGE基因-374T/A多態(tài)性等位基因頻率和基因型頻率兩組的男女構(gòu)成、糖尿病患者比例、吸煙人數(shù)均無明顯差異。但早發(fā)冠心病組中高血壓患者明顯少于晚發(fā)冠心病組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.0005)。兩組的血脂水平大致相等，

13、無明顯差異。兩組均可見TT、TA、AA基因型，但RAGE基因-374T/A多態(tài)性等位基因頻率和基因型頻率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。 5.不同冠狀動脈病變程度的RAGE基因-374T/A多態(tài)性等位基因頻率和基因型頻率根據(jù)主要冠脈(左主干、前降支、回旋支、右冠狀動脈，左主干計為2支血管病變)狹窄≥50﹪，分為1支病變組、2支病變組和3支病變組?；蛐皖l率分布符合Hardy-Weinberg平衡(p=0.242383)。三組

14、均可見TT、TA、AA基因型，但與3支病變組比較，其基因型頻率和等位基因頻率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05) 6.原發(fā)性高血壓組與正常血壓組的RAGE基因-374T/A多態(tài)性等位基因頻率和基因型頻率。原發(fā)性高血壓組與正常血壓組的男女構(gòu)成、吸煙患者比例、血脂水平均無明顯差異(p>0.05)。原發(fā)性高血壓組的年齡大于正常血壓組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.0001)。另外，原發(fā)性高血壓組糖尿病患病率亦明顯多于正常血壓組，差異有統(tǒng)計學(xué)

15、意義(p=0.0218)。兩組均可見TT、TA、AA基因型，符合Hardy-Weinberg平衡，p=0.134。但兩組間的T/A等位基因頻率和基因型頻率的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。單因素logistic回歸分析提示，AA基因型與原發(fā)性高血壓無關(guān)聯(lián)(OR=5.14，95﹪CI[0.608，43.434]，p=0.1327)。 7.根據(jù)是否患有冠心病，分別在原發(fā)性高血壓組和正常血壓組中分為冠心病組與對照組。在原發(fā)性高血壓組的分組中，冠心

16、病組患者的年齡大于對照組患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.001)。而吸煙人數(shù)、糖尿病患病率、血脂水平均無明顯的差異。在正常血壓組的分組中，冠心病組的患者吸煙人數(shù)明顯多于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.0046)。無論是原發(fā)性高血壓組還是正常血壓組中的冠心病組和對照組，都可見TT、TA、AA基因型。但原發(fā)性高血壓組中的冠心病組與對照組間和正常血壓組中的冠心病組與對照組間，RAGE基因-374T/A多態(tài)性等位基因頻率和基因型頻率的差異均