壓力負(fù)荷性心肌肥厚心室重塑和逆向重塑中信號(hào)傳導(dǎo)通路的研究.pdf

1、概述： 心肌肥厚是心臟在負(fù)荷增加時(shí)的一種常見(jiàn)而重要的適應(yīng)性反應(yīng)，可發(fā)生于高血壓、瓣膜病、心肌梗死等多種心血管疾病，流行病學(xué)調(diào)查揭示心肌肥厚是缺血性心臟病、心律失常和猝死的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。心肌肥厚后心室重塑是心力衰竭發(fā)生發(fā)展的重要環(huán)節(jié)。心室重塑是一系列復(fù)雜的分子和細(xì)胞機(jī)制導(dǎo)致的心肌結(jié)構(gòu)、功能和表型的改變。這些改變包括心肌重量和體積的增加，以及心室形狀的改變。近年的研究發(fā)現(xiàn)絲分裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族和核轉(zhuǎn)錄因子(NF-κB)

2、是心肌肥厚心室重塑過(guò)程中重要的中介通路。近來(lái)，左心輔助裝置(LVAD)作為晚期心力衰竭心臟移植前的過(guò)渡治療措施，越來(lái)越受重視。它能明顯提高病人的生存率和生活質(zhì)量和降低晚期心力衰竭病人的死亡率。臨床研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用LVAD能改善心肌的結(jié)構(gòu)和功能，并表現(xiàn)為心室“逆重塑”現(xiàn)象，但受臨床病例的限制和個(gè)體遺傳背景差異的影響，其機(jī)制研究受到限制。因此，在遺傳背景清晰的動(dòng)物模型上制備模擬心室輔助卸負(fù)荷的現(xiàn)象，可以用于深入研究“逆重塑”現(xiàn)象的機(jī)制。

3、 目的： 建立模擬心室輔助的大鼠壓力負(fù)荷性心肌肥厚的卸負(fù)荷模型。研究MAPK家族和NF-κB在心室重塑和逆重塑中的作用。 方法： 1.Lewis大鼠行腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)制備心肌肥厚模型，術(shù)后6周用超聲心動(dòng)圖評(píng)估肥厚模型。 2.分別把心肌肥厚的心臟(肥厚移植組)以及正常的心臟(對(duì)照移植組)稱重，用腹部異位移植法將稱重后的心臟移植到健康的同源Lewis大鼠腹部--將供心的升主動(dòng)脈和主肺動(dòng)脈吻合到受體的腹主動(dòng)脈和

4、下腔靜脈。 3.分別對(duì)假手術(shù)(正常對(duì)照)組、心肌肥厚組觀察點(diǎn)的心臟以及腹部異位移植術(shù)后2周的肥厚移植組、對(duì)照移植組的供心進(jìn)行稱重和取材，并進(jìn)行病理學(xué)、組織學(xué)檢測(cè)。 4.分別對(duì)以上四組進(jìn)行Akt/GSK3β，MAPK和NF-κβ信號(hào)通路以及它們上下游水平上的蛋白檢測(cè)方法(Westernblot)。包括：Akt、GSK3β總水平以及它們的磷酸化水平；MAPK激酶(ERK、p38、、JNK)以及它們相應(yīng)下游特異轉(zhuǎn)錄因子(Elk

5、-1、ATF-2、c-jun)總水平以及它們的磷酸化水平；NFκB以及其抑制因子IkBα總水平以及它們的磷酸化水平。 結(jié)果： 1.動(dòng)物模型的制備共制備腹主動(dòng)脈縮窄模型90例，6周后符合心肌肥厚模型的有60例，成功率為67％。制備大鼠異位心臟移植模型58例，成功32例，成功率55％，冷缺血時(shí)間(30±4)min。 2.心臟重量結(jié)果肥厚組與假手術(shù)組比較，心臟總重量(HW)、左心室重量(LVW)顯著增加(p＜0.01)

6、；肥厚移植組與肥厚組比較，HW、LVW都顯著降低(p＜0.01)；正常卸負(fù)荷后，HW、LVW都顯著降低(p＜0.01)。 3.超聲評(píng)價(jià)結(jié)果肥厚組與假手術(shù)組比較，左心室前壁、后壁舒張厚度(LVAWd、LVPWd)明顯增厚(p＜0.05)；肥厚移植組與肥厚組比較LVAWd和LVPWd顯著降低(p＜0.01)。 4.組織學(xué)檢查結(jié)果肥厚組與假手術(shù)組比較，心肌細(xì)胞橫切面面積(CSA)顯著增加(p＜0.01)，心肌組織膠原分布顯著增

7、加(p＜0.01)；肥厚移植組與肥厚組比較，CSA顯著降低(p＜0.01)，而心肌組織膠原分布顯著增加(p＜0.01)。正常卸負(fù)荷后，CSA無(wú)明顯變化，而心肌組織膠原分布顯著增加(p＜0.01)。 5.蛋白檢測(cè)結(jié)果肥厚組中，ERK、Elk-1；p38、ATF-2；JNK、c-jun；Akt、GSK3β和NF-κB、IkBα的磷酸化明顯增加；而卸負(fù)荷后ERK、E1k-1、Akt、GSK3β和NF-κB、IkBα的磷酸化明顯降低，但