TSC2基因和RB基因在血管平滑肌細(xì)胞中的協(xié)同表達(dá)及意義.pdf

1、目的：
　　 研究TSC2基因與RB基因在不同表型的血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)中的表達(dá)情況,探討VSMC的表型是否與RB基因及TSC2基因的協(xié)同表達(dá)具有相關(guān)性。
　　 方法：
　　 體外培養(yǎng)大鼠主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞,并用血管平滑肌特異性抗體α-SM-actin進(jìn)行免疫熒光鑒定;實(shí)驗(yàn)選用第3-8代細(xì)胞。待細(xì)胞長(zhǎng)至70%融合時(shí),給予無(wú)血清培養(yǎng)基同步化細(xì)胞,同步化48h后,一組繼續(xù)給予無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)24h(模擬收縮型

2、VSMC表型),另一組給予含10%胎牛血清培養(yǎng)基培養(yǎng)24h,并加入血管平滑肌刺激因子PDGF(Platelet-DerivedGrowthFactor血小板源性生長(zhǎng)因子)(模擬合成型VSMC表型),以模擬體內(nèi)血管平滑肌細(xì)胞的正常和增殖表型。應(yīng)用RT-PCR,Western-Blot技術(shù)檢測(cè)RB基因和TSC2基因在不同表型的VSMC中的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.免疫熒光鑒結(jié)果:
　　 倒置顯微鏡下觀察VS

3、MC呈梭形,束狀排列,胞質(zhì)豐富,核里圓形或卵圓形,大小不一的核仁,密度較高時(shí)呈“峰-谷”狀生長(zhǎng)。用α-SM-actin進(jìn)行免疫熒光化學(xué)鑒定,證實(shí)培養(yǎng)的細(xì)胞為VSMC為血管甲滑肌細(xì)胞。
　　 2.RT-PCR結(jié)果顯示:
　　 合成型VSMC中,R13基因和TSC2的表達(dá)均較少,RB基因?yàn)閮?nèi)參(GAPDH)的(0.24±0.03)倍,TSC2基因?yàn)閮?nèi)參(GAPDH)的(0.30±0.04)倍;收縮型VSMC中RB和TSC2基

4、因的表達(dá)較多,RB基因?yàn)閮?nèi)參(GAPDH)的(0.81±0.02)倍,TSC2基因?yàn)閮?nèi)參(GAPDH)的(0.566±0.03)倍。t檢驗(yàn)證明這一結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 3.Western-Blot蛋白印跡結(jié)果顯示:
　　 收縮型VSMC中,RB蛋白和TSC2蛋白的表達(dá)均較多;而P-RB蛋白及P-TSC2蛋白的表達(dá)均較少。RB蛋白的光密度值為(0.613±0.03),P-RB的光密度值為(0.233±0

5、.02)。TSC2蛋白的光密度值為(0.456±0.01);P-TSC2的光密度值為(0.17±0.04)。
　　 合成型VSMC中,RB蛋白和TSC2蛋白的表達(dá)均較少;而P-RB蛋白及P-TSC2蛋白的表達(dá)均較多。RB蛋白的光密度值為(0.184±0.02),P-RB的光密度值為(0.704±0.03)TSC2蛋白的光密度值為(0.212±0.04),P-TSC2的光密度值為(0.436±0.03)。t檢驗(yàn)證明這一結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)