缺氧-復(fù)氧對大鼠血管平滑肌細(xì)胞ACE2基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究短期缺氧/復(fù)氧對大鼠血管平滑肌細(xì)胞ACE2基因表達(dá)的影響。 方法：無菌條件下取出SD大鼠的胸主動脈，留取胸主動脈中膜的血管平滑肌細(xì)胞，運(yùn)用組織貼塊法純化、培養(yǎng)，采用第4-7代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前用含有1％血清的DMEM培養(yǎng)基靜止血管平滑肌細(xì)胞24小時(shí)。利用玻璃干燥缸自制缺氧裝置，并檢測其缺氧效果。然后建立體外血管平滑肌細(xì)胞的缺氧方案，不同時(shí)間點(diǎn)通過倒置顯微鏡觀察血管平滑肌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化、死亡細(xì)胞記數(shù)等指標(biāo)，以此判

2、斷缺氧刺激對體外培養(yǎng)的血管平滑肌細(xì)胞活性的影響。最后提取血管平滑肌細(xì)胞的總RNA，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-PCR)進(jìn)行半定量分析，以α-Actin為內(nèi)對照，研究血管平滑肌細(xì)胞在缺氧24小時(shí)內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)及缺氧24小時(shí)后復(fù)氧不同時(shí)間點(diǎn)ACE2mRNA的表達(dá)變化。 結(jié)果： 1、運(yùn)用組織貼塊法成功培養(yǎng)原代細(xì)胞，培養(yǎng)的血管平滑肌細(xì)胞呈典型的“峰一谷”樣生長，可滿足本實(shí)驗(yàn)的需要。 2、自制的缺氧裝置24小時(shí)內(nèi)氧分壓

3、明顯降低且PH值波動不明顯。對體外細(xì)胞實(shí)施缺氧方案后，24小時(shí)內(nèi)未見明顯的細(xì)胞腫大、漂浮和壞死現(xiàn)象。缺氧組與正常對照組相比較二者差異無顯著性(P>0.05)。 3、RT-PCR結(jié)果的半定量分析表明與正常對照組相比，血管平滑肌細(xì)胞ACE2mRNA表達(dá)在缺氧后4小時(shí)、8小時(shí)時(shí)逐漸下降；但是隨著缺氧時(shí)間的延長，缺氧16小時(shí)時(shí)ACE2基因的表達(dá)水平逐漸增高，缺氧24小時(shí)時(shí)ACE2基因的表達(dá)水平顯著增高(P<0.01)；缺氧24小時(shí)復(fù)氧4