Ox--LDL對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞OPG及RANKL表達(dá)的影響.pdf

1、目的:觀察氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)骨保護(hù)素(Osteoprotegerin，OPG)及核因子-κB受體活化因子配體(Receptor Activator of NF-κB Ligand，RANKL)表達(dá)的影響，進(jìn)而探索動(dòng)脈粥樣硬化形成機(jī)制。
　　方法:本實(shí)驗(yàn)通過體外培養(yǎng)大鼠VSMCs細(xì)胞株(A7R5)，分別進(jìn)行下列實(shí)驗(yàn):①向A7R5內(nèi)分別加入含不同濃度Ox-LDL（0、100μg

2、/ml）的10％胎牛血清(FBS)培養(yǎng)液培養(yǎng)相同時(shí)間(24h)，用免疫熒光法(IF Method)檢測(cè)OPG、RANKL表達(dá)情況。②向A7R5內(nèi)分別加入含不同濃度Ox-LDL（0、25、50、75、100μg/ml）的10％FBS培養(yǎng)液培養(yǎng)相同時(shí)間(24h)，用實(shí)時(shí)定量PCR法(Real-Time PCR)觀察OPG、RANKL mRNA表達(dá)，用免疫共沉淀法(Western Blot)檢測(cè)OPG、RANKL蛋白表達(dá)。③向A7R5內(nèi)加入含

3、相同濃度Ox-LDL(100μg/ml)的10％FBS培養(yǎng)液，分別處理不同時(shí)間(0、4、8、12、24 h)，用Real-Time PCR觀察OPG、RANKL mRNA表達(dá)，用Western Blot檢測(cè)OPG、RANKL蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:①A7R5經(jīng)含不同濃度Ox-LDL（0、100μg/ml）的10％FBS培養(yǎng)液培養(yǎng)24 h，運(yùn)用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)觀察到實(shí)驗(yàn)組(Ox-LDL，100μg/ml) OPG蛋白表達(dá)增強(qiáng)，而RAN

4、KL蛋白表達(dá)下降，與空白組（Ox-LDL，0μg/ml）具有顯著差異(P＜0.05)。②A7R5經(jīng)含不同濃度Ox-LDL（0、25、50、75、100μg/ml）的10％FBS培養(yǎng)液培養(yǎng)相同時(shí)間(24h)，運(yùn)用Real-Time PCR觀察到隨著Ox-LDL濃度不斷增加，OPG mRNA表達(dá)呈上升趨勢(shì)，而RANKL mRNA表達(dá)呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，且兩兩對(duì)比統(tǒng)計(jì)皆存在顯著差異（P＜0.05）;通過Western Blot發(fā)現(xiàn)隨著Ox-LDL濃

5、度不斷增加，OPG蛋白的表達(dá)呈上升趨勢(shì)，而RANKL蛋白的表達(dá)呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，且兩兩對(duì)比統(tǒng)計(jì)皆存在顯著差異（P＜0.05）。③A7R5經(jīng)含相同濃度Ox-LDL（100μg/ml）的10％FBS培養(yǎng)液培養(yǎng)不同時(shí)間(0、4、8、12、24h)，運(yùn)用Real-Time PCR觀察到OPG mRNA表達(dá)隨著培育時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高，而RANKL mRNA表達(dá)逐漸降低，且各組間對(duì)比統(tǒng)計(jì)皆具有顯著差異（P＜0.05）;通過Western Blot發(fā)現(xiàn)OP