色素上皮衍生因子對缺氧復氧后血管平滑肌細胞增殖和凋亡的影響的實驗性研究.pdf

1、研究背景：
　　我國有心肌梗死（MI）患者超過四百萬，并且每年以至少五十萬的速度在增長，這一疾病嚴重威脅著人民的生命和健康。目前，傳統(tǒng)的內(nèi)、外科療法對冠狀動脈彌漫性狹窄或心肌細胞大量壞死已經(jīng)形成大量瘢痕的患者療效不佳。近年來，干細胞移植為治療MI帶來了新的希望。在眾多干細胞中，因為骨髓基質(zhì)干細胞（MSCs）易于分離、培養(yǎng)、擴增、免疫原性低，可向損傷部位趨化等生物學特性而成為理想的移植細胞，是目前國際上研究的熱點。越來越多的研究表明

2、MSCs在MI處主要通過旁分泌作用促進MI的恢復。即MSCs可以在梗死部位分泌大量的活性因子發(fā)揮多種生物學作用。色素上皮衍生因子（pigment epithelium-derived factor，PEDF）是 MSCs分泌的一種重要的細胞因子，屬于無蛋白酶抑制劑功能的絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族成員，廣泛存在于人的組織中，具有營養(yǎng)和保護神經(jīng)、抑制腫瘤、抑制血管生成、抗氧化、抗炎和抑制血栓形成等特性。其中，PEDF抑制血管生成的功能引起了廣

3、泛的關注，但其抑制新生血管生成的機理尚未完全明確。前期研究都集中于對MSCs分泌的促進血管生成因子的生物學行為對MI病理過程作用及機制的研究，但對于抑制血管生成因子的研究鮮有報道。本研究通過缺氧/復氧(H/R)模型模擬缺血再灌注損傷，初步探討重組人源性PEDF對缺氧/復氧后血管平滑肌細胞（VSMCs）和增殖及凋亡的影響及其機制，為MSCs移植治療 MI帶來新的靶點。
　　研究方法：
　　以組織貼塊法原代培養(yǎng)VSMCs，隨機分

4、為3組，即對照組、H/R模型組及模型+PEDF組。模型+PEDF組又按 PEDF的濃度（50、100、200及400ng/ml）分為4組。用MTT比色法檢測VSMCs增殖的變化；用Hoechst/PI雙染色法和流式細胞儀法（FCM）檢測VSMCs的凋亡；用Western Blot測定VSMCs凋亡相關蛋白Bcl-2、Bax的表達。
　　研究結(jié)果：
　　1．MTT比色法檢測顯示：H/R可以促進VSMCs增殖，經(jīng)PEDF處理后，

5、能抑制其增殖，以濃度為200ng/ml效果最為顯著(P<0.01)。
　　2．Hoechst/PI雙染色法和流式細胞術（FCM）檢測顯示：經(jīng)200ng/ml PEDF+H/R處理后，VSMCs凋亡率較對照組和H/R組明顯增高(P<0.01)
　　3．Western Blot檢測顯示：VSMCs經(jīng)200ng/ml的PEDF+H/R處理，能夠下調(diào)Bcl-2蛋白表達并上調(diào)Bax蛋白表達(P<0.01)。
　　結(jié)論：
　

6、　1．H/R能夠誘導VSMCs的異常增殖，PEDF能夠抑制H/R后VSMCs的異常增殖，促進其凋亡，其抑制效果最顯著的PEDF濃度是200ng/ml。但是，PEDF對常氧條件培養(yǎng)的VSMCs增殖沒有抑制作用，可能會使PEDF的應用更加廣泛。
　　2．PEDF誘導VSMCs的凋亡，其通路可能是通過上調(diào)凋亡相關蛋白Bax表達，下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達。是否還有其他通路有待進一步研究證實。
　　3．通過我們采用的組織貼塊法培