HIV-1與CD4+T細胞F-actin相互作用的實時動態(tài)成像研究.pdf

1、CD4+T細胞是HIVW-1病毒侵染的重要宿主細胞，其肌動蛋白F-actin在HIV-1侵染過程中起著關鍵作用。然而，對于F-actin在HIV-1侵染過程中作用的理解，主要來自于體外生化實驗、電子顯微鏡成像以及免疫組化等研究結果。迄今，還未能實現HIV-1病毒侵染CD4+T細胞過程中與F-actin相互作用的實時動態(tài)成像。本研究基于對HIV-1病毒的熒光標記和CD4+T細胞F-actin的熒光標記，利用激光共聚焦熒光顯微鏡和超分辨SI

2、M成像分析技術，實時、動態(tài)、超分辨可視化研究HIV-1與CD4+T細胞F-actin的相互作用。
　　首先，在包含HIV-1全基因組的pNL4-3質粒中插入mCherry基因，構建mCherry與MA相融合的重組質粒pNL4-3MA-mCherry，并通過轉染表達、純化富集、表征驗證，獲得了具有侵染活性的mCherry熒光標記的HIV-1病毒顆粒。分離獲取人外周血CD4+T細胞，轉染pEGFP-C1-Lifeact質粒，實現了CD

3、4+T細胞F-actin的熒光標記。
　　其次，在HIV-1侵染CD4+T細胞過程中，利用激光共聚焦成像技術，在活細胞內實時動態(tài)研究F-actin的動態(tài)變化及其與HIV-1病毒相互作用過程。結果表明，HIV-1的吸附導致CD4+T細胞F-actin動力學過程發(fā)生改變，病毒加速了F-actin的解聚、聚合過程，通過這一途徑，HIV-1病毒迅速與細胞發(fā)生膜融合，進入細胞。
　　最后，利用超分辨SIM成像技術，進一步超分辨研究了H

4、IV-1侵染CD4+T細胞過程中F-actin的動態(tài)變化和相互作用過程。與寬場熒光顯微成像相比，超分辨SIM模式成像分辨率有顯著提高，通過這種方式，我們能夠更加精細的分析F-actin的解聚和聚合變化過程及其與病毒的相互作用。
　　綜上，本研究實現了HIV-1病毒與CD4+T細胞F-actin相互作用的單細胞動態(tài)實時超分辨成像，解析了病毒侵染與F-actin解聚、聚合過程的相互作用關系，對深入理解HIV-1侵染CD4+T細胞的過程