c-raf在精原干細胞中的表達及作用的研究.pdf

1、目的：完善大鼠精原干細胞的分離和體外培養(yǎng)技術；研究c-raf對精原干細胞體外培養(yǎng)的存活作用及機制。 方法：非連續(xù)密度梯度離心及差速貼壁法分離精原干細胞；c-kit細胞免疫組織化學鑒定精原干細胞；基因測序和SeqMan、檢驗精原干細胞擴增DNA和c-raf的同源性；MTT比色法檢測體外培養(yǎng)精原干細胞的存活及增殖情況，觀察c-raf AON對精原干細胞體外培養(yǎng)存活的量效關系及c-raf AON對精原干細胞體外培養(yǎng)存活的時效關系；RT

2、-PCR檢測c-raf mRNA和caspasc-3 mRNA的表達情況；TUNEL檢測c-raf，AON對精原干細胞凋亡的影響。 結果：非連續(xù)密度梯度離心及差速貼壁法分離的精原干細胞，經臺盼藍染色計數(shù)其存活率分別為92.3％和91.5％；分離后的精原干細胞經c—kit鑒定其純度為90.1％；精原干細胞在含10％NBS的DMEM中培養(yǎng)120h時增殖達高峰，在無10％NBS的DMEM中培養(yǎng)其存活率持續(xù)下降；精原干細胞擴增DNA和c

3、-raf的同源性為98％；15μmol/L c-raf AON作用12h后精原干細胞存活率下降(P＜0.05)。于18h后存活率持續(xù)下降(P＜0.05)；與對照組相比c-raf AON組的c-raf mRNA水平明顯下調(P＜0.05)，而caspase-3 mRNA表達水平明顯上調(P＜0.05)：c-raf AON組凋亡指數(shù)(40.5％)明顯大于對照組(30.2％)和錯義組(29.4％)的凋亡指數(shù)(P＜0.05)。 結論：非