糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)肝臟膽汁酸代謝及其機(jī)制研究.pdf

1、膽固醇是細(xì)胞膜的重要組成成分，是體內(nèi)類固醇激素，脂溶性維生素和膽汁酸的重要的前體物質(zhì)。膽汁酸不僅促進(jìn)體內(nèi)脂類物質(zhì)的消化吸收，并且也作為一種信號(hào)分子，共同參與調(diào)節(jié)體內(nèi)糖脂代謝與能量代謝的穩(wěn)態(tài)平衡。高膽固醇血癥和高水平膽汁酸可引起一系列的代謝性疾病，如心血管疾病，膽石癥，肝內(nèi)膽汁淤積和肝癌等。機(jī)體內(nèi)一系列復(fù)雜而精確的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控膽固醇和膽汁酸水平，使其維持穩(wěn)態(tài)。法尼醇X 受體（FXR）是核受體家族成員之一，研究表明，F(xiàn)XR 不僅通過參與膽汁酸代

2、謝的多個(gè)環(huán)節(jié)，對(duì)膽汁酸的生成進(jìn)行負(fù)反饋調(diào)節(jié)，維持體內(nèi)膽固醇和膽汁酸的穩(wěn)態(tài)，同時(shí)還對(duì)體內(nèi)糖脂代謝，能量代謝發(fā)揮重要的調(diào)控作用。糖皮質(zhì)激素是由腎上腺皮質(zhì)束狀帶合成和分泌的激素，具有調(diào)節(jié)碳水化合物，蛋白質(zhì)，脂肪及水，鹽，電解質(zhì)的代謝，維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境平衡以及抑制免疫/炎癥等多項(xiàng)生理功能。糖皮質(zhì)激素在體內(nèi)通過激活糖皮質(zhì)激素受體（GR），發(fā)揮其相應(yīng)的功能。目前有臨床病例報(bào)告指出內(nèi)源性皮質(zhì)醇增高的患者（庫(kù)欣綜合征）中存在膽汁淤積及膽汁酸的代謝障礙。同

3、時(shí)有研究表明糖皮質(zhì)激素是膽汁淤積疾病的危險(xiǎn)因素，但關(guān)于這種現(xiàn)象發(fā)生的分子機(jī)制研究很少。
　　 本文通過觀察C57小鼠以及FXR敲除型小鼠給予糖皮質(zhì)激素之后，肝臟膽汁酸代謝及糖脂代謝變化，深入研究糖皮質(zhì)激素與肝臟膽汁酸代謝障礙之間的聯(lián)系，并進(jìn)一步闡明糖皮質(zhì)激素導(dǎo)致肝臟膽汁酸代謝障礙的機(jī)制，從而為膽汁淤積與膽結(jié)石的預(yù)防提供了一個(gè)新的靶點(diǎn)。C57 小鼠給予地塞米松DEX 處理兩周后，我們發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，無論在基礎(chǔ)狀態(tài)還是致結(jié)石飲食

4、的負(fù)荷狀態(tài)下，糖皮質(zhì)激素處理后小鼠膽囊的重量和容積明顯增加，血清和肝臟中的膽汁酸的濃度明顯升高。同時(shí)，參與膽汁酸生成的相關(guān)基因表達(dá)增高。由于法尼醇X 受體（FXR）在膽汁酸代謝中發(fā)揮極為重要的作用，調(diào)控膽汁酸生成代謝中的多個(gè)環(huán)節(jié)。因此，這些膽汁酸代謝障礙提示FXR 可能與這些表型變化有關(guān)。我們進(jìn)一步利用FXR 野生型與敲除型小鼠進(jìn)行研究。FXR 野生型及敲除型小鼠分別給予DEX 處理兩周后，我們發(fā)現(xiàn)，在糖皮質(zhì)激素處理之后，F(xiàn)XR 野生型

5、和敲除型小鼠體內(nèi)的皮質(zhì)醇和ACTH 的水平被反饋抑制，小鼠的血糖，血游離脂肪酸，血清和肝臟的甘油三酯水平均有明顯的升高，提示DEX 引起的這些糖脂代謝變化是不依賴于FXR 的。然而，值得引起重視的是，野生型小鼠中，DEX 處理后，血清和肝臟中膽汁酸的水平明顯升高。FXR 敲除型的小鼠中，由于失去了FXR 對(duì)膽汁酸生成的負(fù)反饋調(diào)節(jié)，空白對(duì)照處理的情況下，體內(nèi)血清和肝臟膽汁酸的濃度與野生型相比已有明顯升高，DEX 的處理下，血清和肝臟中膽汁

6、酸并未發(fā)生明顯改變。這一現(xiàn)象提示我們，糖皮質(zhì)激素對(duì)于小鼠膽汁酸代謝的異常是通過FXR 發(fā)揮作用的。庫(kù)欣綜合征是機(jī)體內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素水平明顯升高的一類疾病，我們發(fā)現(xiàn)，庫(kù)欣綜合征患者的血膽汁酸水平明顯升高。同時(shí)我們還發(fā)現(xiàn)，自身免疫系統(tǒng)疾病長(zhǎng)期接受外源性糖皮質(zhì)激素治療的患者，血膽汁酸的水平也是明顯升高的。這些結(jié)果說明在人體內(nèi)高糖皮質(zhì)激素的狀態(tài)下，膽汁酸的代謝存在障礙。目前已經(jīng)公認(rèn)，糖皮質(zhì)激素發(fā)揮作用是通過糖皮質(zhì)激素受體（GR）實(shí)現(xiàn)的。糖皮質(zhì)激

7、素受體是核受體家族成員之一，在沒有配體結(jié)合的情況下，與熱休克蛋白相結(jié)合，存在于胞漿中。當(dāng)糖皮質(zhì)激素與其受體GR 結(jié)合后，GR 發(fā)生轉(zhuǎn)位，由胞漿轉(zhuǎn)位到胞核中，形成同二聚體，結(jié)合到靶基因的反應(yīng)元件，調(diào)控基因的表達(dá)。我們?cè)谛∈蠛透咂べ|(zhì)醇血癥的患者中發(fā)現(xiàn)糖皮質(zhì)激素可以導(dǎo)致體內(nèi)膽汁酸生成增多，并進(jìn)一步通過一系列體外實(shí)驗(yàn)深入地探討了GR 與FXR 之間的關(guān)系。通過體外蛋白質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)GR 與FXR 之間存在著相互作用。借助報(bào)告基因瞬時(shí)