陽離子脂質體介導TIMP-3基因瞬時表達對兔血管平滑肌細胞增殖遷移及凋亡的影響.pdf

1、目的：通過陽離子脂質體介導含有TIMP-3基因的質粒轉染體外兔血管平滑肌細胞，觀察瞬時表達的TIMP-3對細胞增殖、遷移及凋亡的影響，討論TIMP-3基因治療冠心病支架治療再狹窄(ISR)的前景。 方法：第一階段：構建兔TIMP-3基因質粒表達載體。按照正常對照組、空質粒組、重組質粒載體組將72孔兔血管平滑肌細胞分為3組，每組又分為24小時、48小時、72小時3個亞組，每個亞組n=8；陽離子脂質體介導質粒分別轉染相應組細胞，正常

2、對照組無質粒加入。轉染后24小時、48小時、72小時進行細胞計數、描繪細胞生長曲線；ELISA法測定細胞培養(yǎng)上清液中MMP-2含量；RT-PCR分析細胞TIMP-3mRNA水平。第二階段：將24孔細胞分為3組進行基因轉染，各組n=8。轉染后48小時檢測細胞凋亡率。第3階段：細胞遷移實驗在12個Transwell小室中進行。將稀釋ECMgel等體積均勻涂于Transwell上室濾膜，成膠后分為3組進行基因轉染，每組n=4。轉染后在下室中加

3、入等體積含高濃度血清細胞培養(yǎng)基，上室加入不含血清細胞培養(yǎng)基，溫育48小時后，HE染色，計算遷移至ECMgel和濾膜外表面的細胞數，每張濾膜隨機取5個視野。 結果：所有數據均通過．SSPSl2.0統(tǒng)計軟件進行分析，以P<0.05認為結果有意義。正常對照組細胞數、MMP-2含量、TIMP-3mRNA表達情況、細胞凋亡率、遷移細胞數與空質粒組相比均無明顯差別；重組質粒組細胞數、MMP-2含量、遷移細胞數與前兩者相比明顯減少，P<0.0