非綜合征型耳聾線粒體DNA突變及其臨床表型多樣性的研究.pdf

1、目的： 1．分析非綜合征型耳聾患者(nonsyndromic hearing loss，NSHL)及健康體檢者中3種線粒體DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)突變的發(fā)生頻率、性質及臨床資料特點，探討線粒體DNA突變與非綜合征型耳聾的關系。 2．對mtDNA A1555G突變進行定量研究，探討mtDNA A1555G突變的拷貝數(shù)與臨床表型之間的關系，進一步闡明非綜合征型耳聾臨床表型多樣性的分子遺傳學基礎

2、。 方法： 1．應用PCR-限制性酶切和測序對486例散發(fā)NSHL患者mtDNA Al555G、mtDNA A3243G、mtDNA A7445G三個位點的突變進行檢測。收集七個mtDNA A1555G突變的耳聾家系。 2．建立RT-ARMS-qPCR系統(tǒng)對含突變型和野生型mtDNA 1555位點的片段的拷貝數(shù)進行定量檢測。 3．結合散發(fā)組和家系組耳聾患者的臨床資料，統(tǒng)計分析mtDNA Al555G突變的

3、拷貝數(shù)與臨床表型多樣性的關系。 結果： 1．486例NSHL患者mtDNA Al555G突變陽性率為9.05％(44/486)，44例mtDNA Al555G突變中32例為同質性突變，12例為異質性突變；檢出1例mtDNA G7444A突變；所有樣本均未檢出mtDNA A3243G、mtDNA A7445G突變；100例健康體檢者中上述三個位點均未檢出突變。 2．共調查七個家系中的113人，男46人，女67人，年

4、齡3個月至82歲，耳聾患者28人。其中母系成員57人，耳聾患者26人，臨床癥狀從正常到極重度聾，因部分家系成員外出未能采集到血樣，有完整資料71人(母系成員52人，耳聾患者26人)。mtDNA Al555G突變52人，其中同質性突變45人，異質性突變7人。氨基糖甙抗生素是這些家系致聾的重要原因。 3．RT-ARMS-qPCR技術對含mtDNA點突變的DNA片段的定量檢測結果穩(wěn)定、準確。 4．散發(fā)組mtDNA Al555G

5、同質性突變的拷貝數(shù)與耳聾輕重程度無關(R=0.001，P=0.997)：散發(fā)組mtDNA Al555G異質性突變的拷貝數(shù)與耳聾輕重程度相關(R=0.771，P=0.003)，突變型的比例越高，耳聾程度越嚴重；家系組mtDNA Al555G同質性突變的拷貝數(shù)與耳聾輕重程度相關(R=0.341，P=0.022)，突變型mtDNA Al555G拷貝數(shù)越高，耳聾程度越重；家系組mtDNA Al555G異質性突變的拷貝數(shù)與耳聾輕重程度相關 (R=

6、0.85，P=0.015)，突變的比例越高，耳聾程度越嚴重。 結論： 1．首次實驗證實mtDNA A1555G的突變形式有同質性和異質性兩種：mtDNA Al555G是導致NSHL最常見的突變形式，與氨基糖甙抗生素致聾密切相關。mtDNA A3423G、 mtDNA A7445G在NSHL中突變率低。新發(fā)現(xiàn)了一個mtDNA G7444A突變的NSHL家系。 2．RT-ARMS-qPCR技術對定量檢測含mtDNA