山西省非綜合征型耳聾基因的突變分析以及新突變功能預(yù)測(cè).pdf

1、背景：耳聾是最常見(jiàn)的感覺(jué)系統(tǒng)缺陷性疾病之一，多為遺傳因素所致，其遺傳異質(zhì)性高，至今與其相關(guān)的耳聾基因有兩百多個(gè)。按遺傳性耳聾表型不同，可將其化分兩類(lèi)，一類(lèi)為綜合征型耳聾（SHL），即除聽(tīng)力下降外還伴有其他系統(tǒng)的臨床癥狀；另一類(lèi)是非綜合征型耳聾（NSHL），即除聽(tīng)力下降外無(wú)其他臨床癥狀，其中在遺傳性耳聾中，NSHL占70％以上。現(xiàn)在許多研究表明耳聾主要與4個(gè)基因（GJB2、GJB3、SLC26A4、mtDNA）相關(guān)，臨床上的耳聾基因診斷也

2、是針對(duì)這4個(gè)基因的熱點(diǎn)突變進(jìn)行檢測(cè)，然而有相當(dāng)一部分的NSHL患者并未找到這些熱點(diǎn)突變，因而得不到早期診斷，所以如何提高耳聾基因診斷率，成為難題也成為熱點(diǎn)。
　　目的：本課題將基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)、高通量基因捕獲技術(shù)、Sanger測(cè)序三種方法相結(jié)合，統(tǒng)計(jì)山西地區(qū)NSHL常見(jiàn)基因熱點(diǎn)突變，尋找新的具有山西特色的熱點(diǎn)致病突變，從而為耳聾的早期診斷和治療提供依據(jù)。
　　方法：由山西省太原市中心醫(yī)院收集山西省各地區(qū)聾

3、啞學(xué)校NSHL患者300例，首先利用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜法篩查300例標(biāo)本4個(gè)常見(jiàn)致病基因20個(gè)熱點(diǎn)突變位點(diǎn)，統(tǒng)計(jì)其各個(gè)位點(diǎn)的突變率；其次利用高通量基因捕獲技術(shù)檢測(cè)在20個(gè)位點(diǎn)未發(fā)現(xiàn)突變的患者中選取的20例標(biāo)本，統(tǒng)計(jì)熱點(diǎn)突變位點(diǎn)，針對(duì)新熱點(diǎn)突變，利用在線(xiàn)功能預(yù)測(cè)軟件預(yù)測(cè)其對(duì)蛋白功能的破壞性；最后利用Sanger測(cè)序檢測(cè)剩余標(biāo)本中經(jīng)高通量基因捕獲技術(shù)篩選出的熱點(diǎn)突變，統(tǒng)計(jì)其在散發(fā)人群中的突變率，從而驗(yàn)證篩選出的突變是否為山西N

4、SHL患者的熱點(diǎn)突變（針對(duì)新發(fā)現(xiàn)的突變，以200例健康人標(biāo)本作為對(duì)照）。
　　結(jié)果：
　　1.基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜法檢測(cè)300例標(biāo)本后，152例發(fā)生突變，其中GJB3基因未發(fā)現(xiàn)突變。
　　2.在剩余的148例標(biāo)本中選取20例，經(jīng)過(guò)高通量基因捕獲技術(shù)檢測(cè)后，發(fā)現(xiàn)三個(gè)熱點(diǎn)突變：SLC26A4基因c.1334T>G( p.L445W)突變、WFS1基因c.2596G>A( p.D866N)突變、MYO7A基因 c

5、.5662C>T( p.H1888Y)突變，其中 c.1334T>G( p.L445W)、c.2596 G>A( p.D866N)是已被報(bào)道過(guò)的致病突變；另一個(gè)是首次發(fā)現(xiàn)的可疑致病性突變。
　　3.通過(guò)對(duì)剩余的128例標(biāo)本針對(duì)上述三個(gè)熱點(diǎn)突變進(jìn)行Sanger測(cè)序驗(yàn)證后，有3例發(fā)生c.2596 G>A( p.D866N)，未發(fā)現(xiàn)c.1334T>G( p.L445W)和c.5662C>T(p.H1888Y)突變，正常對(duì)照組也未發(fā)現(xiàn)c.

6、5662C>T( p.H1888Y)突變，此突變致病性有待進(jìn)一步研究。
　　結(jié)論：
　　1.山西省遺傳性耳聾的主要致病基因?yàn)镚JB2、SLC26A4、mtDNA，但各個(gè)突變位點(diǎn)攜帶率與其他地區(qū)差別明顯；c.235delC和c.299-300delAT突變是GJB2基因的熱點(diǎn)突變位點(diǎn)， IVS7-2A>G和c.2168A>G突變是SLC26A4基因的熱點(diǎn)突變位點(diǎn)， c.1555A>G突變是線(xiàn)粒體12S rRNA基因的熱點(diǎn)突變位