免疫細(xì)胞因子基因及相關(guān)miRNAs在肉雞急性冷、熱應(yīng)激中的表達(dá)調(diào)控研究.pdf

1、高密度集約化的飼養(yǎng)模式極易使肉雞產(chǎn)生熱應(yīng)激。但是，濕簾以及降溫措施不當(dāng)使用又極易產(chǎn)生冷應(yīng)激。急性冷、熱應(yīng)激的發(fā)生首先破壞的是家禽機(jī)體的免疫機(jī)能，嚴(yán)重影響肉雞的商品化生產(chǎn)，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。采用現(xiàn)代生物檢測(cè)技術(shù)研究急性冷熱應(yīng)激條件下肉雞免疫細(xì)胞因子基因在各免疫器官中的表達(dá)規(guī)律，揭示micRNAs與其靶基因?qū)毙詰?yīng)激的調(diào)控機(jī)理，為培育抗寒抗熱肉雞品種提供理論依據(jù)，具有重大的實(shí)際生產(chǎn)意義。
　　本實(shí)驗(yàn)以45只28日齡體重及健康狀況相近

2、的羅斯308肉雞為研究對(duì)象，分為正常對(duì)照組、熱應(yīng)激組和冷應(yīng)激組分別模擬實(shí)際生產(chǎn)產(chǎn)生急性熱應(yīng)激反應(yīng)和冷應(yīng)激反應(yīng)。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)8個(gè)免疫細(xì)胞因子基因(IL-1、IL-1α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12α、IL-12β、INF-γ)和4個(gè)熱應(yīng)激蛋白基因(Hsp60、Hsp70、Hsp90和Hsp110)在脾臟、胸腺、法氏囊、肝臟、心臟等組織中的表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定分析。并采用miRNA測(cè)序技術(shù)對(duì)脾臟組織的miRNAs進(jìn)行檢測(cè)，

3、篩選差異表達(dá)miRNAs，并預(yù)測(cè)其靶基因。進(jìn)一步從細(xì)胞水平和分子水平對(duì)差異表達(dá)miRNAs與細(xì)胞因子基因互作進(jìn)行驗(yàn)證，揭示差異miRNAs及其靶基因?qū)毙岳錈釕?yīng)激的調(diào)控機(jī)理。研究得到以下結(jié)果:
　　1.在脾臟組織中，只有急性熱應(yīng)激條件下IL-1α和IL-1兩個(gè)基因表達(dá)影響顯著升高(P＜0.05);在胸腺組織中，除IL-12α表達(dá)在各處理組無顯著變化，其余7個(gè)細(xì)胞因子表達(dá)量均顯著下降;在法氏囊組織中，各處理組均未檢測(cè)到IL-12α的

4、表達(dá)，急性熱應(yīng)激條件下其他7個(gè)細(xì)胞因子基因表達(dá)均顯著下降(P＜0.05)。
　　2.在心臟組織與肝臟組織中，急性熱應(yīng)激條件下HSP70與HSP110表達(dá)極顯著升高(P＜0.01)。
　　3.對(duì)脾臟組織miRNA測(cè)序結(jié)果揭示，根據(jù)|log2Fold|＞1和p value＜0.05原則，正常組和熱應(yīng)激組之間篩選出12個(gè)差異表達(dá)miRNAs，在正常組和冷應(yīng)激組之間發(fā)現(xiàn)1個(gè)差異表達(dá)miRNAs，在冷應(yīng)激和熱應(yīng)激組之間篩選出20個(gè)差異

5、表達(dá)miRNAs。通過對(duì)所有差異表達(dá)miRNAs把基因的預(yù)測(cè)，篩選出4個(gè)差異表達(dá)miRNAs的靶基因?yàn)槊庖呒?xì)胞因子基因。
　　4.通過WEGO和GO Pathway通路富集分析，急性熱應(yīng)激條件下差異表達(dá)miRNAs顯著富集在細(xì)胞因子互作的通路中。
　　5.雙熒光素酶報(bào)告結(jié)果表明，gga-miR-34a-5P和gga-miR-449c-5P對(duì)IL-2和IL-12α的表達(dá)具有負(fù)調(diào)控的作用。
　　綜上所述，本研究結(jié)果表明，急