熱應(yīng)激細(xì)胞中CIITA基因的表觀遺傳調(diào)控研究.pdf

1、第一部分，MHCⅡ類分子是重要的免疫調(diào)節(jié)因子，組成性表達(dá)于哺乳動物細(xì)胞表面，負(fù)責(zé)細(xì)胞外抗原的加工、呈遞以活化CD4+T淋巴細(xì)胞，從而激發(fā)適應(yīng)性免疫系統(tǒng)對外來病原體的清除。CⅡTA是MHCⅡ類分子轉(zhuǎn)錄活化子，直接調(diào)控MHCⅡ類分子的表達(dá)。在腫瘤免疫研究中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，多數(shù)腫瘤細(xì)胞能夠憑借表面MHCⅠ類和Ⅱ類分子的低表達(dá)或表達(dá)缺失降低其免疫原性，從而逃避機(jī)體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視和清除。在這些腫瘤細(xì)胞中，PRC2復(fù)合物介導(dǎo)的CⅡTA啟動子區(qū)的組蛋白H3

2、K27三甲基化抑制CⅡTA的表達(dá)，如果誘導(dǎo)CⅡTA基因表達(dá)，則腫瘤細(xì)胞表面的MHCⅡ類分子表達(dá)水平相應(yīng)被上調(diào)，進(jìn)而使腫瘤相關(guān)抗原被遞呈給CD4+T淋巴細(xì)胞，從而在體內(nèi)激發(fā)抗同種腫瘤的免疫反應(yīng)。
　　 文獻(xiàn)報道，熱休克蛋白90，60，70等是天然免疫系統(tǒng)的共刺激活化分子，對MHCⅡ分子的抗原遞呈具有重要作用。本實驗研究發(fā)現(xiàn)，熱休克能夠誘導(dǎo)人Jurkat細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞中的CⅡTA表達(dá)和細(xì)胞表面MHcⅡ類分子的α亞基，HLA-D

3、R的表達(dá)，而熱休克蛋白90不參與熱休克誘導(dǎo)的CⅡTA和HLA-DR表達(dá)。通過進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，熱休克能夠激活JAK-STAT信號通路，誘導(dǎo)PRC2復(fù)合物中組蛋白賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶EZH2泛素化后經(jīng)26S蛋白酶體途徑降解。使用JAK2的抑制劑AG490，或者敲低JAK2都能夠阻斷熱休克誘導(dǎo)的EZH2蛋白降解。EZH2的降解不僅導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)組蛋白H3K27的三甲基化修飾整體水平下降，而且使得EZH2在CⅡTA-Ⅳ啟動子區(qū)的募集減少，從而使CⅡTA

4、-Ⅳ啟動子區(qū)H3K27三甲基化水平下降，CⅡTA基因轉(zhuǎn)錄活化。
　　 綜上所述，我們發(fā)現(xiàn)的熱休克通過誘導(dǎo)EZH2降解導(dǎo)致CⅡTA基因轉(zhuǎn)錄活化這一現(xiàn)象表明，環(huán)境因素能夠通過表觀遺傳調(diào)控影響腫瘤細(xì)胞的MHCⅡ類分子表達(dá)，有可能增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的免疫原性。
　　 第二部分，附錄：其它相關(guān)工作細(xì)胞應(yīng)激條件下熱休克蛋白90α／β二聚化的實驗研究
　　 熱休克蛋白90是重要的、高度保守的分子伴侶蛋白，通過輔助多達(dá)兩百多種蛋白行使

5、功能而廣泛參與細(xì)胞生理功能。腫瘤細(xì)胞能夠利用熱休克蛋白90的分子伴侶功能保護(hù)自身突變或表達(dá)異常的原癌蛋白兔于降解。因此認(rèn)為，熱休克蛋白90對于原癌基因表達(dá)和腫瘤細(xì)胞存活至關(guān)重要。當(dāng)熱休克或其它環(huán)境應(yīng)激條件下，熱休克因子會被活化形成三聚體并結(jié)合在熱休克蛋白90的啟動子區(qū)熱休克反應(yīng)元件，誘導(dǎo)其表達(dá)。在細(xì)胞質(zhì)中，存在有Hsp90α和Hsp90β兩種熱休克蛋白90的異構(gòu)體。盡管二者氨基酸序列高度一致，但卻分別被定位于不同染色體上的兩個基因編碼。

6、Hsp90α和β盡管高度同源，但生理和細(xì)胞應(yīng)激條件下，二者的功能都有不同。目前已知Hsp90主要以同源二聚體的形式存在并發(fā)揮作用，對Hsp90α和β異源二聚體的功能和調(diào)節(jié)還不清楚。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)熱休克和過氧化氫能夠促進(jìn)Jurkat細(xì)胞中Hsp90α和β的亞細(xì)胞定位和相互作用。而組蛋白去乙?；D(zhuǎn)移酶HDAC的抑制劑TrichostatinA能夠誘導(dǎo)Hsp90的高乙?；⒁种萍?xì)胞應(yīng)激誘導(dǎo)的Jurkat細(xì)胞中Hsp90α和β的亞細(xì)胞定位