槲皮素對人腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)協(xié)同刺激分子B7RP-1影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本研究旨在觀察槲皮素(quercetin)對人腎小管上皮細(xì)胞株HK-2表達(dá)協(xié)同刺激分子B7RP-1的影響，探討槲皮素對腎小球腎炎發(fā)生、發(fā)展過程中細(xì)胞免疫的影響，更深入的了解槲皮素對腎臟具有保護(hù)作用的機(jī)制。同時(shí)也為腎炎性疾病的治療提供新的思路。 方法：體外培養(yǎng)人腎小管上皮細(xì)胞株(HK-2)，給予不同濃度的槲皮素和相應(yīng)干預(yù)因素，采用四甲基偶氮鹽滲入法(MTT法)檢測細(xì)胞增殖情況；采用細(xì)胞免疫熒光(IF)方法和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)

2、(RT-PCR)分別檢測槲皮素對腫瘤壞死因子α(TNF-α)誘導(dǎo)下協(xié)同刺激分子B7RP-1和B7RP-1mRNA表達(dá)的影響。 結(jié)果： 1．槲皮素對HK-2增殖的影響在5～15umol/L濃度范圍內(nèi)，觀察槲皮素以不同劑量干預(yù)腎小管上皮細(xì)胞不同時(shí)間(12～60小時(shí))對HK-2的增殖的影響。結(jié)果較小劑量實(shí)驗(yàn)組與對照組之間，各實(shí)驗(yàn)組之間差異均無顯著意義(P>0.05)；較大劑量槲皮素(15umol/l)可以抑制HK-2的增殖(P

3、<0.05)。 2．不同劑量槲皮素對TNF-α誘導(dǎo)HK-2表達(dá)B7RP-1的影響以不同濃度(5～15umol/L)槲皮素干預(yù)HK-2細(xì)胞24小時(shí)，結(jié)果B7RP-1的表達(dá)較陽性及正常對照組加強(qiáng)，各實(shí)驗(yàn)組與對照組之間差異有顯著意義(P<0.05)。表明槲皮素可上調(diào)腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)B7RP-1。 3．同一劑量槲皮素干預(yù)不同時(shí)間對TNF-α誘導(dǎo)HK-2表達(dá)B7RP-1的影響腎小管上皮細(xì)胞以槲皮素(10umol/L)處理12～6

4、0小時(shí)后，經(jīng)細(xì)胞免疫熒光染色觀察B7RP-1的表達(dá)情況，結(jié)果B7RP-1的表達(dá)先增強(qiáng)后減弱，表達(dá)最強(qiáng)在48小時(shí)處，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且存在線性關(guān)系(P<0.05)。 4．不同劑量槲皮素對TNF-α誘導(dǎo)下HK-2表達(dá)B7RP-1mRNA的影響以不同濃度(5～15umol/L)槲皮素干預(yù)HK-2細(xì)胞24小時(shí)，結(jié)果B7RP-1mRNA的表達(dá)較陽性及正常對照組加強(qiáng)，各實(shí)驗(yàn)組與對照組之間差異有顯著意義(P<0.05)。表明槲皮素可從基因水

5、平上調(diào)腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)B7RP-1。 5．同一劑量槲皮素干預(yù)不同時(shí)間對TNF-α誘導(dǎo)下HK-2表達(dá)B7RP-1mRNA的影響。 腎小管上皮細(xì)胞以槲皮素(10umol/L)處理6～60小時(shí)后，經(jīng)RT-PCR檢測B7RP-1mRNA的表達(dá)情況，結(jié)果B7RP-1mRNA的表達(dá)先增強(qiáng)后減弱，表達(dá)最強(qiáng)在24小時(shí)處，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且存在線性關(guān)系(P<0.05)。 結(jié)論：<1>在排除槲皮素對腎小管上皮細(xì)胞增殖的影響后，槲