整合素與鈣通道協(xié)同調(diào)節(jié)人腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化過程的研究.pdf

1、目的: 用轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β1)誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)轉(zhuǎn)分化,探討轉(zhuǎn)分化過程中可能的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制；丹酚酸B（SA-B）對(duì)HK-2細(xì)胞轉(zhuǎn)分化過程的干預(yù)作用。
　　 方法: TGF-β1 (5ng/ml）刺激HK-2，用特異性細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)抑制劑PD98059（25 μmol/L）、鈣通道拮抗劑Nifedipine（10 μmol/L)及丹酚酸B（SA-B）（10μmol/L）處理；于不同時(shí)間段分用

2、免疫熒光、S-P法和免疫印跡的方法檢測(cè)黏著斑激酶（FAK）、整合素β1（β1-Integrin）。
　　 結(jié)果:
　　 ①相比空白組TGF-β1成功誘導(dǎo)HK-2轉(zhuǎn)分化。
　　 ②TGF-β1刺激15min后FAK-Tyr397磷酸化增強(qiáng),60min達(dá)頂峰。相比TGF-β1對(duì)照組，PD98059使FAK-Tyr397的磷酸化減弱（P<0.05）而Nifedipine無明顯抑制作用(P>0.05)，PD98059與N

3、ifedipine協(xié)同作用明顯(P<0.01），SA-B具有同樣抑制作用（P<0.01）。
　　 ③相比對(duì)照組,PD98059、SA-B使FAK蛋白表達(dá)呈時(shí)間依賴性減弱(前者P<0.05；后者P<0.01),PD98059與Nifedipine協(xié)同作用明顯(P<0.01）。
　　 ④PD98059及Nifedipine均呈時(shí)間依賴性抑制β1-Integrin表達(dá)（P<0.05）。兩者協(xié)同作用明顯(P<0.01）；SA-B