空氣或純氧復(fù)蘇宮內(nèi)窒息新生大鼠血?dú)夂痛竽XSOD水平的比較.pdf

1、新生兒窒息是常見(jiàn)臨床問(wèn)題,也是導(dǎo)致新生兒早期死亡和遠(yuǎn)期神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥的重要原因之一.正確的新生兒復(fù)蘇技術(shù)能有效降低窒息新生兒死亡率,減少神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥,對(duì)提高人口素質(zhì)具有重要意義.一直以來(lái),人們普遍接受采用純氧作為新生兒復(fù)蘇氣源的做法,而事實(shí)上這種做法缺乏足夠的理論依據(jù).隨著對(duì)新生兒窒息后病理生理學(xué)改變,以及高濃度氧氣可能對(duì)新生兒產(chǎn)生不良后果的了解,新生兒復(fù)蘇氣源的選擇問(wèn)題開(kāi)始受到重視.盡管目前有關(guān)新生兒復(fù)蘇氣源選擇的問(wèn)題仍然存在爭(zhēng)論,

2、但是保證復(fù)蘇氣源的有效性和安全性是此問(wèn)題的關(guān)鍵. 上世紀(jì)80年代,歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家學(xué)者開(kāi)始對(duì)空氣作為新生兒復(fù)蘇氣源的有效性進(jìn)行研究,此類(lèi)研究大部分為動(dòng)物實(shí)驗(yàn),以新生動(dòng)物缺氧缺血性腦損傷為研究模型,比較空氣和純氧復(fù)蘇的效果.但是由于這些研究以生后數(shù)天健康穩(wěn)定的新生動(dòng)物為對(duì)象,忽視新生動(dòng)物白宮內(nèi)向?qū)m外過(guò)渡的環(huán)節(jié),故對(duì)此類(lèi)動(dòng)物模型進(jìn)行復(fù)蘇不能很好地反映新生兒窒息復(fù)蘇的真實(shí)過(guò)程.此外,簡(jiǎn)單地以動(dòng)物缺氧缺血性腦損傷模型來(lái)替代新生兒窒息也不十分恰當(dāng).

3、為使有關(guān)新生兒復(fù)蘇氣源選擇問(wèn)題的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容更接近人類(lèi)新生兒窒息,有必要建立更為合理的動(dòng)物模型. 氧自由基(reactive oxygen species,ROS)包括超氧陰離子、羥自由基、氫過(guò)氧化物及超氧氮化合物等.ROS由于電子不配對(duì),具有高度生物活性,會(huì)對(duì)許多細(xì)胞成分如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)及DNA等造成損害.此外其還可通過(guò)多種機(jī)制觸發(fā)細(xì)胞凋亡.目前研究表明,機(jī)體組織在缺氧缺血后再灌注過(guò)程中,會(huì)產(chǎn)生一定數(shù)量ROS,從而進(jìn)一步加重組織

4、細(xì)胞的損傷.所以在新生兒復(fù)蘇氣源選擇問(wèn)題中,組織產(chǎn)生氧自由基的水平可以作為評(píng)價(jià)內(nèi)容之一.超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)是機(jī)體重要的ROS清除劑之一,其活性下降可作為評(píng)定氧自由基生成的指標(biāo),而且其含量變化還可以間接地反映組織氧自由基的數(shù)量,進(jìn)而預(yù)測(cè)組織細(xì)胞可能受到氧自由基損傷的程度. 本次研究通過(guò)建立與人類(lèi)窒息新生兒更為接近的宮內(nèi)窒息新生大鼠模型,比較采用空氣或者純氧復(fù)蘇后,新生大鼠復(fù)蘇后短期死

5、亡率以及復(fù)蘇后新生動(dòng)物血?dú)庾兓痛竽XSOD水平等方面的差異,為新生兒復(fù)蘇氣源的選擇提供一些實(shí)驗(yàn)依據(jù). 方法: 第一部分:宮內(nèi)窒息新生大鼠模型的建立 建模前根據(jù)抽簽法隨機(jī)決定每只新生大鼠的分組,參照Loidl和Harald H的方法建立宮內(nèi)窒息新生大鼠模型.取孕齡21天清潔級(jí)SD大鼠8只,分別將其斷頭后,以下腹正中線(xiàn)切開(kāi)腹部,迅速剖宮娩出對(duì)照組新生大鼠,結(jié)扎并離斷含有剩余胎鼠的子宮,將其置于37℃生理鹽水中水浴15

6、分鐘,然后再剖宮娩出窒息組新生大鼠.所有納入研究的新生大鼠體重要求在4.5-5.5克,雌雄不限.對(duì)照組新生大鼠12只,宮內(nèi)窒息組新生大鼠14只.觀察各組新生大鼠出生當(dāng)時(shí)的表現(xiàn),并在生后30秒內(nèi)斷頭取血,比較各組新生大鼠血?dú)饨Y(jié)果. 第二部分:空氣或純氧復(fù)蘇宮內(nèi)窒息新生大鼠血?dú)饧按竽XSOD水平比較 建模前根據(jù)抽簽法隨機(jī)決定每只新生大鼠的分組,參照第一部分方法建立動(dòng)物模型.取孕齡21天的清潔級(jí)SD大鼠7只,分別對(duì)其進(jìn)行剖宮產(chǎn),

7、得到對(duì)照組新生大鼠24只,宮內(nèi)窒息后采用空氣復(fù)蘇組新生大鼠26只,采用純氧復(fù)蘇組新生大鼠27只.對(duì)照組新生大鼠剖宮產(chǎn)娩出后,迅速擦干其全身后置于己預(yù)熱至28-30℃的環(huán)境中.宮內(nèi)窒息新生大鼠剖宮產(chǎn)娩出后,迅速擦干其全身后分別置于已預(yù)熱至28-30℃的空氣或純氧環(huán)境中,通過(guò)刺激新生大鼠口周及腹部皮膚促其自主呼吸的方法進(jìn)行復(fù)蘇,復(fù)蘇時(shí)間為30分鐘.如新生大鼠在復(fù)蘇時(shí)間結(jié)束后仍無(wú)自主呼吸,同時(shí)膚色灰白,對(duì)外界刺激無(wú)反應(yīng),即被認(rèn)為死亡,不再進(jìn)行

8、后續(xù)研究.我們首先判斷復(fù)蘇后0小時(shí)新生大鼠的存活情況,然后根據(jù)抽簽結(jié)果分別于復(fù)蘇后0小時(shí),6小時(shí),24小時(shí)斷頭處死存活新生大鼠,取血進(jìn)行血?dú)夥治?取大腦組織進(jìn)行SOD水平檢測(cè). 結(jié)果: 第一部分宮內(nèi)窒息新生大鼠模型的建立 1、各組新生大鼠出生當(dāng)時(shí)的表現(xiàn):宮內(nèi)窒息組新生動(dòng)物剖宮產(chǎn)娩出后,85.7﹪(12/14)新生大鼠未立即出現(xiàn)自主呼吸,14.3﹪(2/14)出現(xiàn)微弱呼吸;所有新生大鼠膚色呈灰白色;對(duì)照組新生大鼠剖

9、宮產(chǎn)娩出后,100﹪(12/12)新生大鼠立即出現(xiàn)自主呼吸,膚色均呈粉紅色. 2、各組新生大鼠血?dú)獾谋容^:宮內(nèi)窒息組新生大鼠血?dú)鈖H,PO<,2>,PCO<,2>,BE分別為6.70±0.11,39.7±5.2mmHg,90.4±10.6mmHg,-21.3±2.2mmol/L,對(duì)照組新生大鼠血?dú)鈖H,PO<,2>,PCO<,2>,BE分別為7.13±0.04,46.5±5.6mmHg,59.2±7.8 mmHg,-8.2±2.

10、9mmol/L,兩組比較,各指標(biāo)差異均有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01). 第二部分空氣或純氧復(fù)蘇宮內(nèi)窒息新生大鼠血?dú)夂痛竽XSOD的比較 1、各組新生大鼠死亡率的比較:純氧復(fù)蘇組新生大鼠復(fù)蘇后死亡率為3.7﹪(1/27),空氣復(fù)蘇組新生大鼠復(fù)蘇后死亡率為0(0/26),對(duì)照組新生大鼠死亡率為0(0/24).各組比較,差異無(wú)顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05). 2、各組新生大鼠血?dú)獾谋容^:純氧復(fù)蘇組新生大鼠復(fù)蘇后0小

11、時(shí)血PO<,2>明顯高于采用空氣復(fù)蘇組(69.2±8.2 mmHg vs 55.5±10.3mmHg).兩組比較,差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.004).純氧復(fù)蘇組新生大鼠復(fù)蘇后0小時(shí)血pH,PCO<,2>,BE分別為6.97±0.05,60.3±12.4mmHg,-17.7±2.0mmol/L,空氣復(fù)蘇組血pH,PCO<,2>,BE分別為6.99±0.10,60.4±12.8minHg,-17.0±2.5mmol/L.兩組比較,各差

12、異均無(wú)顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05):采用純氧復(fù)蘇組新生大鼠復(fù)蘇后6小時(shí)、24小時(shí)血pH,PO<,2>,PCO<,2>,BE與空氣復(fù)蘇組比較,各差異均無(wú)顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05). 3、各組新生大鼠大腦SOD水平的比較:純氧復(fù)蘇組新生大鼠復(fù)蘇后0小時(shí),6小時(shí)大腦SOD水平分別為38.3±9.8U/mgprot,8.6±3.6U/mgprot,空氣復(fù)蘇組新生大鼠復(fù)蘇后0小時(shí),6小時(shí)大腦SOD水平分別為53.8±10.6 U

13、/mgprot,13.0±4.6 U/mgprot.兩組比較,各差異均有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).純氧復(fù)蘇組新生大鼠復(fù)蘇后24小時(shí)大腦SOD水平與空氣復(fù)蘇組比較,差異無(wú)顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).空氣或純氧復(fù)蘇組新生大鼠復(fù)蘇后0小時(shí),6小時(shí),24小時(shí)大腦SOD水平均低于對(duì)照組(P<0.01). 結(jié)論: 1 本法建立的宮內(nèi)窒息模型效果可靠,且更類(lèi)似于人類(lèi)新生兒窒息的臨床表現(xiàn)及血?dú)馓卣? 2 采用空氣復(fù)