非諾貝特在乳腺癌中增加抗雌激素治療敏感性及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的:體外實驗研究非諾貝特在乳腺癌中增加抗雌激素治療敏感性的作用及其可能機(jī)制。
　　方法:采用細(xì)胞計數(shù)試劑盒-8法(Cell count kit-8，CCK-8)檢測對照組、非諾貝特單藥組、抗雌激素藥物單藥組和兩藥聯(lián)合組的細(xì)胞活力，克隆形成實驗觀察四組細(xì)胞生長能力，流式細(xì)胞儀檢測凋亡細(xì)胞比例和細(xì)胞周期分布比例，免疫印跡法（Western Blot）檢測相關(guān)通路蛋白水平。
　　結(jié)果:1.非諾貝特在雌激素受體(Estrogen

2、receptor，ER)陽性的乳腺癌細(xì)胞中能增加抗雌激素藥物（他莫昔芬和氟維司群）的敏感性。在ER陽性的兩株乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和T47D中，抗雌激素藥物和非諾貝特聯(lián)合組的細(xì)胞明顯較兩個單藥組細(xì)胞活力低。使用Comsyn軟件計算不同濃度聯(lián)合作用下的CI(Combination index)值均＜0.9，提示非諾貝特和抗雌激素藥物有協(xié)同作用?？寺⌒纬蓪嶒灨庇^地顯示了非諾貝特的增敏作用。
　　2.非諾貝特對抗雌激素藥物的增敏作用是

3、過氧化物酶體增殖物激活受體-α（Peroxisome proliferator-activated receptor-alpha，PPAR-α）非依賴的。在對照組，非諾貝特單藥組，抗雌激素藥物單藥組和兩藥聯(lián)合組中加入5μM的PPAR-α特異性抑制劑GW6471后，非諾貝特對抗雌激素藥物的增敏作用仍存在，且CI值＜0.9。
　　3.在MCF-7細(xì)胞中，非諾貝特和抗雌激素藥物聯(lián)合組出現(xiàn)較明顯G0/G1期細(xì)胞阻滯，且該期細(xì)胞較兩個單藥組

4、明顯升高，其中單藥組和TAM聯(lián)合非諾貝特組的G0/G1期細(xì)胞所占比例為43.2％、49.8％和62.2％，單藥組和氟維司群聯(lián)合非諾貝特組的G0/G1期細(xì)胞所占比例為25.2％、20.8％和31.9％。同時細(xì)胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和細(xì)胞周期蛋白依賴激酶4（Cyclin-dependent kinase-4，CDK4）和CDK6的表達(dá)水平下調(diào);p21、p27/Kip1的表達(dá)水平上調(diào)。
　　4.非諾貝特和抗雌激素藥物聯(lián)合組

5、的細(xì)胞凋亡比例較單藥組的升高，其中單藥組和TAM聯(lián)合非諾貝特組的凋亡細(xì)胞比例為7.1％、10.7％和18.3％，單藥組和氟維司群聯(lián)合非諾貝特組的G0/G1期細(xì)胞所占比例為12.6％、14.7％和24.3％。Bad、cleaved PARP蛋白表達(dá)水平上調(diào)，Survivin蛋白表達(dá)水平下調(diào)。
　　5.非諾貝特和抗雌激素藥物的協(xié)同作用也可能和自噬相關(guān)。pmTOR和pAkt蛋白表達(dá)水平下調(diào)，LC3BⅡ/LC3BⅠ的蛋白水平上調(diào)。白噬抑制