Beclin1對雌激素受體陽性乳腺癌的三苯氧胺敏感性和預后的影響及相關機制.pdf

1、研究背景:
　　乳腺癌是女性最為常見的惡性腫瘤，其中70％為雌激素受體(ER)陽性的患者。以三苯氧胺等為代表的內分泌治療是ER陽性的乳腺癌最有效的治療方法之一，然而耐藥情況的發(fā)生使乳腺癌患者難以從中獲益。Beclin1在疾病中的作用往往歸咎于其在自噬中的重要表現(xiàn)，然而除此以外，因Beclin1是Vps34/PI3KC3復合物的核心成員，它在調控膜轉運事件中也有重要作用。Beclin1在調節(jié)眾多腫瘤細胞的生存和死亡中發(fā)揮了重要作用，

2、但其在ER陽性乳腺癌中的作用仍然未知。
　　研究目的:
　　研究Beclin1對ER陽性乳腺癌的三苯氧胺敏感性及預后的影響及相關機制。
　　研究方法與結果:
　　本課題使用免疫組織化學染色檢測乳腺癌組織標本中Beclin1的表達，發(fā)現(xiàn)Beclin1在ER陽性乳腺癌中的表達水平和人類表皮生長因子受體2（HER2）表達水平存在正相關(P＜0.01)，而與ER陽性乳腺癌患者的總生存期存在負相關(P＜0.01)。通過生物

3、信息學方法（Kaplan Meier Plotter數(shù)據(jù)庫）發(fā)現(xiàn)，在經(jīng)三苯氧胺治療的ER陽性乳腺癌患者中，Beclin1的表達與總生存期存在負相關(P＜0.05)。本課題通過體外細胞培養(yǎng)的方法建立了ER陽性的人乳腺癌細胞系MCF-7的三苯氧胺耐藥株MCF-7R。采用Western Blot檢測發(fā)現(xiàn)在MCF-7R細胞中Beclin1和HER2的蛋白表達水平均高于MCF-7細胞。接下來，我們運用siRNA瞬時轉染的方法下調了MCF-7和MC

4、F-7R細胞中Beclin1的蛋白表達水平。進一步的研究發(fā)現(xiàn)下調了Beclin1的MCF-7和MCF-7R細胞生長能力有一定減弱而凋亡有一定的增加。更為有趣的是，下調了Beclin1的MCF-7和MCF-7R細胞對三苯氧胺的敏感性明顯高于對照組細胞，表現(xiàn)為在三苯氧胺作用下細胞體外增殖能力和克隆形成能力減弱，凋亡增加，細胞周期G0/G1期阻滯增加以及遷移、侵襲的能力減弱。接著采用Western Blot和qPCR的方法發(fā)現(xiàn)下調了Becli

5、n1的MCF-7和MCF-7R細胞中HER2的表達水平均低于轉染了陰性對照siRNA細胞。在三苯氧胺作用后，下調Beclin1的MCF-7和MCF-7R細胞HER2表達水平依舊低于對照組，此外，相對于轉染陰性對照siRNA組的細胞，它們的磷酸化Akt和磷酸化ERK1/2的蛋白表達水平下調，凋亡蛋白caspase-3和PARP剪切體表達水平上調，抗凋亡蛋白Bcl-2表達水平下調，而自噬相關蛋白LC3B的表達水平的變化不顯著。我們運用慢病毒

6、介導RNA干擾MCF-7細胞中的Beclin1表達并建立了穩(wěn)定低表達Beclin1的細胞株MCF-7/Beclin1和對照細胞株MCF-7/V。我們發(fā)現(xiàn)與之前結果相似地，MCF-7/Beclin1相較于MCF-7/V的三苯氧胺敏感性較高而且HER2表達水平較低。我們運用過表達質粒上調MCF-7/Beclin1中的HER2表達，發(fā)現(xiàn)可以一定程度上逆轉MCF-7/Beclin1對三苯氧胺的相對高敏感性。在三苯氧胺作用下，相對于轉染陰性對照質

7、粒的MCF-7/Beclin1細胞，過表達HER2的MCF-7/Beclin1體外增殖能力和克隆形成能力增加，細胞凋亡減少，細胞G0/G1期阻滯也相對減少。此外，在三苯氧胺作用下， MCF-7/Beclin1細胞過表達HER2后可以逆轉之前變化的磷酸化Akt和ERK1/2蛋白和凋亡相關蛋白的表達水平。
　　研究結論:
　　本課題發(fā)現(xiàn)ER陽性乳腺癌組織中的Beclin1表達與HER2表達之間正相關，并與患者的預后負相關。首次提