柴胡干根藥材的分子鑒別及遺傳多樣性分析.pdf

1、本文首先簡(jiǎn)要概述了柴胡的研究概況，并從形態(tài)學(xué)、細(xì)胞、生化研究、DNA分子標(biāo)記等水平概括了柴胡遺傳多樣性的研究進(jìn)展，重點(diǎn)闡述了本研究的研究內(nèi)容、創(chuàng)新點(diǎn)和研究意義。
　　柴胡是我國的傳統(tǒng)常用中藥，具有重要的藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。2005版《中華人民共和國藥典》記載柴胡的來源為傘形科植物柴胡(Bupleurum Chinese DC.)和狹葉柴胡(Bupleurum scorzonerifolium Willd.)的干燥根。而柴胡各栽培地

2、的種植來源復(fù)雜，加之諸多因素導(dǎo)致所產(chǎn)的藥材質(zhì)量良莠不齊，藥材鑒別困難，這就給柴胡資源的研究、保存、評(píng)價(jià)、利用以及新種質(zhì)的開發(fā)等帶來很大困難。
　　本文以14個(gè)柴胡栽培品干根藥材為材料進(jìn)行RAPD分析。首先優(yōu)化了RAPD反應(yīng)體系中模板DNA濃度、引物濃度、dNTP濃度、Taq酶的用量等參數(shù)。然后在優(yōu)化條件下使用篩選出的RAPD特異引物OPD-8對(duì)樣品進(jìn)行擴(kuò)增，得到了RAPD指紋圖譜及遺傳聚類圖。結(jié)果可知:當(dāng)相似性系數(shù)為0.930時(shí)，

3、各個(gè)柴胡樣品單獨(dú)聚為一類，僅使用一條引物就可將供試樣品全部區(qū)別開來;并獲得了優(yōu)良品種ZQ-T的穩(wěn)定存在的RAPD特異性標(biāo)記，記為OPD-82500。接著本文采用了新的數(shù)據(jù)處理方法，即利用Gene-Snap軟件將RAPD圖譜中每個(gè)泳道的電泳圖譜轉(zhuǎn)換為光密度對(duì)Rf的曲線。供試樣品所具有的曲線分別不同，每個(gè)峰代表一個(gè)條帶。當(dāng)Rf值為0.365時(shí)，只有樣品ZQ-T出現(xiàn)了明顯的峰，此峰即代表了ZQ-T的特征條帶OPD-82500。它可作為重要的分

4、子性狀用于快速鑒別該樣品，為從分子水平鑒別柴胡干根藥材及建立一種新的中藥材鑒別方法提供參考。
　　接著本文利用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)研究了柴胡不同種、同種不同栽培品間的遺傳多樣性及親緣關(guān)系，采用篩選出的E-AAC/M-CTA、E-AGG/M-CTG和E-AGG/M-CAA3對(duì)引物構(gòu)建了14個(gè)柴胡干根樣品的AFLP指紋圖譜。結(jié)果表明:14個(gè)樣品共擴(kuò)增出106條清晰可辨的條帶，其中90條具有多態(tài)性，多態(tài)性比率為84.91％，多態(tài)率最高的

5、引物組合為E-AGG/M-CTG，多態(tài)性比率達(dá)到86.96％。14個(gè)樣品間的相似性系數(shù)介于0.326-0.848之間，其中7號(hào)(LC-L)和8號(hào)(LC-T)的相似系數(shù)最大，為0.848，它們分別是陵川當(dāng)?shù)胤N種于陵川和太谷，說明它們?cè)谶z傳上具有相對(duì)穩(wěn)定性。并用UPGMA法對(duì)14個(gè)樣品進(jìn)行了聚類分析，結(jié)果表明:相似性系數(shù)在0.480時(shí)，14個(gè)樣聚為2大類，10、11號(hào)（紅柴胡）聚為一類，其余12個(gè)樣聚為另一類，其中7號(hào)和8號(hào)最先聚到一起，它