上皮細(xì)胞黏附因子調(diào)控下咽癌生長轉(zhuǎn)移作用機(jī)制的研究.pdf

1、下咽癌是頭頸部常見的惡性腫瘤之一，近年來，盡管手術(shù)結(jié)合放化療的綜合治療不斷發(fā)展，但是下咽癌的5年生存率仍保持在15％-30％，未有明顯提高，治療失敗的主要原因是腫瘤的轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)。因此，尋找腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)鍵因子并探討腫瘤增殖轉(zhuǎn)移的潛在機(jī)制，對(duì)下咽癌的治療具有重要意義。上皮細(xì)胞黏附因子(epithelialcelladhesionmolecule，EpCAM)是一種跨膜糖蛋白，在多種腫瘤中高表達(dá)，且其表達(dá)與腫瘤的增殖轉(zhuǎn)移相關(guān)。有關(guān)研究證實(shí)，Ep

2、CAM與頭頸部腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，但其具體作用存在爭議。而關(guān)于EpCAM表達(dá)對(duì)下咽癌轉(zhuǎn)移的影響及機(jī)制仍不清楚。本研究檢測了EpCAM在下咽癌組織中的表達(dá)情況，通過干擾下咽癌FaDu細(xì)胞系中EpCAM的表達(dá)，探討了EpCAM因子對(duì)下咽癌轉(zhuǎn)移及增殖的影響，并進(jìn)一步探討其作用機(jī)制。
　　目的
　　1.探討EpCAM在下咽癌組織的表達(dá)及其表達(dá)強(qiáng)度與T分期、N分期的關(guān)系。
　　2.探討EpCAM對(duì)下咽癌FaDu細(xì)胞系侵襲轉(zhuǎn)移

3、和增殖克隆的影響。
　　3.初步探討EpCAM影響FaDu細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移增殖克隆的作用機(jī)制。
　　材料與方法
　　以40例人下咽癌組織及10例正常上皮組織制作石蠟標(biāo)本，免疫組化法檢測EpCAM的表達(dá)，以下咽癌FaDu細(xì)胞系為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，運(yùn)用EpCAMsiRNA干擾FaDu細(xì)胞EpCAM的表達(dá)。Transwell檢測EpCAM對(duì)FaDu細(xì)胞系遷移能力和侵襲能力的影響;平板集落形成實(shí)驗(yàn)檢測EpCAM對(duì)FaDu細(xì)胞克隆形成能力的

4、影響。細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)（MTT法）觀察EpCAM對(duì)FaDu細(xì)胞增殖能力的影響;WesternBlot檢測干擾EpCAM表達(dá)后致瘤和轉(zhuǎn)移相關(guān)因子E-cadherin，α-catenin，和β-catenin的表達(dá)變化。
　　結(jié)果
　　1.EpCAM在下咽癌組織中高表達(dá)，免疫組化法發(fā)現(xiàn)EpCAM主要在下咽癌組織的細(xì)胞膜表達(dá)，且其表達(dá)強(qiáng)度隨著下咽癌組織T分期以及N分期的增高而增強(qiáng)。
　　2.下咽癌FaDu細(xì)胞經(jīng)EpCAMsiRN

5、A干擾后，在RNA水平和蛋白質(zhì)水平EpCAM表達(dá)顯著降低。
　　3.降低EpCAM表達(dá)后可以抑制FaDu細(xì)胞侵襲能力和遷移能力。
　　4.降低EpCAM表達(dá)后可以抑制FaDu細(xì)胞增殖能力及克隆能力。
　　5.降低EpCAM表達(dá)后，細(xì)胞骨架中的E-cadherin，α-catenin，和β-catenin表達(dá)顯著升高，而在細(xì)胞質(zhì)中的E-cadherin，α-catenin，和β-catenin表達(dá)降低，總蛋白水平無明顯變