載HIF-1α基因PLGA納米粒制備、性質(zhì)及其生物活性的研究.pdf

1、目的：重組pcDNA3.1(+)-HIF-1α質(zhì)粒，制備pcDNA3.1(+)-HIF-1α的PLGA納米粒，考察其一般性質(zhì)、體外釋藥特性，檢測納米粒HIF-1α蛋白的表達(dá)，為脊髓損傷動物模型的基因治療實(shí)驗(yàn)提供資料。 方法：①構(gòu)建HIF-1α基因和真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(+)的重組體并用雙酶切鑒定和基因序列測定HIF-1α基因。②應(yīng)用復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備pcDNA3.1(+)-HIF-1α的PLGA納米粒，用正交設(shè)計法對納米

2、粒子的制備工藝進(jìn)行優(yōu)化，觀察納米粒的形態(tài)、大小和粒徑分布，研究體外釋藥特性、抗核酸酶降解性能。③用PLGA-pcDNA3.1(+)-HIF-1α納米粒轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞。試驗(yàn)隨機(jī)分四組：分別為：a、空白對照組，b、PLGA納米粒組，c、pcDNA3.1(+)-HIF-1α組，d、PLGA-pcDNA3.1(+)-HIF-1α組。用Western-blot檢測PLGA納米粒子中HIF-1α蛋白表達(dá)。 結(jié)果：用正交設(shè)計法優(yōu)化制備工藝成

3、功構(gòu)建pcDNA3.1(+)-HIF-1α的PLGA納米粒，形態(tài)圓整，大小均勻，平均粒徑102nm，含藥量0.83％，包封率可達(dá)72％，有對抗核酸酶降解的能力，體外釋藥緩慢，達(dá)25天。Western-blot檢測PLGA-pcDNA3.1(+)-HIF-1α納米粒可持續(xù)高效表達(dá)HIF-1α蛋白。 結(jié)論：1、成功構(gòu)建PLGA-pcDNA3.1(+)-HIF-1α納米粒。2、PLGA-pcDNA3.1(+)-HIF-1α納米粒具有生