趨化因子SDF-1-CXCR4信號通路參與大鼠切口痛.pdf

1、背景與目的：
　　術(shù)后疼痛是手術(shù)后即刻發(fā)生的急性疼痛，其性質(zhì)為傷害性疼痛，通常持續(xù)時間≤7d。術(shù)后疼痛嚴(yán)重影響了病人的病理生理狀態(tài)，不利于病人的術(shù)后恢復(fù)。
　　近年來術(shù)后疼痛的防治越來越受到重視，術(shù)后疼痛的研究和治療也取得了較大的進展。局部麻醉藥、阿片類、對乙酰氨基酚、非甾體類抗炎藥、COX2抑制劑等一大批術(shù)后鎮(zhèn)痛藥物相繼應(yīng)用于臨床，取得了較好的效果。但是目前的每種鎮(zhèn)痛藥物鎮(zhèn)痛方法都存在其副作用及其局限性，因此了解術(shù)后疼痛的

2、分子機制，尋找術(shù)后疼痛治療的新靶點仍是當(dāng)前該領(lǐng)域研究的熱點。近年來在疼痛的研究中越來越多的人證明炎癥因子參與了疼痛的機制，在疼痛的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。趨化因子屬于趨化細(xì)胞因子家族，是分子量在10KDa左右的一組分泌型單鏈蛋白質(zhì)，因?qū)Π准?xì)胞具有趨化作用而得名，對炎癥因子的調(diào)節(jié)起著重要作用。趨化因子SDF-1(stromalcell-derivedfactor-1)屬于CXC類趨化因子，其受體CXCR4(CXCchemokinerec

3、eptor4)屬于CXCR類G蛋白偶聯(lián)受體超家族。炎癥因子在疼痛中發(fā)揮著重要作用，SDF-1/CXCR4對炎癥因子有重要的調(diào)節(jié)作用，SDF-1/CXCR4是否參與疼痛的機制目前尚不清楚。本研究旨在通過大鼠切口痛模型模擬術(shù)后疼痛，應(yīng)用CXCR4受體拮抗劑AMD3100，觀察術(shù)后大鼠的疼痛情況來探討SDF-1/CXCR4信號通路在術(shù)后疼痛中的作用。
　　第一部分：中樞神經(jīng)系統(tǒng)中SDF-1/CXCR4對切口痛的影響
　　材料與方法

4、：
　　雄性SD大鼠（體重180-220g）55只，采用完全隨機設(shè)計分為5組:切口+鞘內(nèi)注射鹽水組、切口+鞘內(nèi)注射5μg阻斷劑組、切口+鞘內(nèi)注射10μg阻斷劑組、切口+鞘內(nèi)注射20μg阻斷劑組、單純切口組。所有大鼠均吸入七氟烷麻醉，制備左后足切口痛模型;切口組分別在術(shù)前及術(shù)后6h、1d、3d、7d灌注取材脊髓腰膨大、L4、5背根神經(jīng)節(jié)(DRG)，免疫熒光組織化學(xué)法染色，熒光顯微鏡下觀察SDF-1、CXCR4的表達(dá)。鹽水組、5μg阻

5、斷劑組、10μg阻斷劑組、20μg阻斷劑組分別在切皮開始前30min和術(shù)后1-5d每天鞘內(nèi)注射生理鹽水以及5μg、10μg、20μgAMD3100;術(shù)前3d、2d、1d以及術(shù)后2h、1-7d檢測痛行為學(xué)指標(biāo):機械刺激縮足閾值(pawwithdrawalmechanicalthreshold，PMWT)、熱縮足潛伏期(pawwithdrawalthermallatency,PWTL)、累計疼痛評分(cumulativepainscore，

6、CPS)。
　　結(jié)果：
　　1.痛行為學(xué)變化
　　各組大鼠術(shù)前縮足閾值、縮足潛伏期和累計疼痛評分差異無顯著性;與術(shù)前基礎(chǔ)值比較，各組術(shù)后縮足閾值和縮足潛伏期均出現(xiàn)不同程度降低(P＜0.01)，累計疼痛評分出現(xiàn)了不同程度的升高。與鹽水組比較，5μg阻斷劑組、10μg阻斷劑組和20μg阻斷劑組在術(shù)后1-6d縮足閾值和縮足潛伏期均出現(xiàn)不同程度的升高（P＜0.05），呈劑量依賴性，累計疼痛評分在1-6d也出現(xiàn)了不同程度的降低（

7、P＜0.05），呈劑量依賴性。
　　2.組織病理學(xué)結(jié)果分析
　　免疫熒光組織化學(xué)法染色與術(shù)前比較，脊髓背角和DRG中術(shù)后SDF-1和CXCR4的表達(dá)有明顯增高，6h即可觀察到表達(dá)增多，1d表達(dá)最強，持續(xù)至術(shù)后7d。
　　第二部分：外周切口局部SDF-1/CXCR4對切口痛的影響
　　材料與方法：
　　雄性SD大鼠(體重180-220g)35只，采用完全隨機設(shè)計分為3組:切口+局部注射鹽水組、切口+局部注射5

8、0μg阻斷劑組、單純切口組。所有大鼠均吸入七氟烷麻醉，制備左后足切口痛模型;切口組分別在術(shù)前及術(shù)后6h、1d、3d、7d灌注取材切口部皮膚組織，免疫熒光組織化學(xué)法染色，熒光顯微鏡下觀察SDF-1、CXCR4的表達(dá)。鹽水組、50μg阻斷劑組分別在切皮開始前30min和術(shù)后1-5d每天左后足皮下注射生理鹽水、50μgAMD3100;術(shù)前3d、2d、1d、及術(shù)后2h、1-7d檢測痛行為學(xué)指標(biāo):機械刺激縮足閾值、熱縮足潛伏期和累計疼痛評分。

9、r>　　結(jié)果：
　　1.痛行為學(xué)變化
　　兩組大鼠術(shù)前縮足閾值、縮足潛伏期和累計疼痛評分差異無顯著性;與術(shù)前基礎(chǔ)值比較，兩組大鼠術(shù)后縮足閾值和縮足潛伏期均出現(xiàn)不同程度降低（P＜0.05），累計疼痛評分出現(xiàn)了不同程度的升高。與鹽水組比較，50μg阻斷劑組縮足閾值在術(shù)后2h-6d出現(xiàn)不同程度的升高(P＜0.05)，縮足潛伏期在術(shù)后1-6d出現(xiàn)不同程度的升高(P＜0.05)，累計疼痛評分在術(shù)后1-6d出現(xiàn)不同程度的降低(P＜0.0