七氟烷預(yù)處理對(duì)鼠大腦局灶性缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、腦缺血再灌注損傷是臨床上影響腦缺血病人治療效果的重要因素之一，目前發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，缺乏特異性治療手段。凋亡作為神經(jīng)元的主要死亡方式之一在腦缺血再灌注損傷中占有重要地位，因此抗凋亡治療有可能成為臨床治療腦缺血再灌注損傷的重要手段。七氟烷是一種新型吸入麻醉氣體，最近有研究發(fā)現(xiàn)七氟烷可以通過(guò)類似于缺血預(yù)處理或KATP通道激動(dòng)劑的機(jī)制減輕腦缺血再灌注損傷。我們對(duì)大鼠進(jìn)行七氟烷預(yù)處理，觀察其對(duì)大腦局灶性缺血再灌注損傷的作用及可能的抗凋亡機(jī)制

2、。 方法第一部分：七氟烷預(yù)處理對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷神經(jīng)缺失癥狀及梗死體積的影響 12只大鼠隨機(jī)分為缺血再灌注組和七氟烷預(yù)處理組。根據(jù)ZeaLonga等的改良方法建立右大腦中動(dòng)脈阻閉再灌注模型。七氟烷預(yù)處理組在缺血再灌注前先接受1h的七氟烷預(yù)處理(2.4％)。再灌注24h后參考ZeaLonga等的方法進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分，TTC染色法觀察各組腦梗死體積。 第二部分：七氟烷預(yù)處理對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷神經(jīng)

3、元凋亡的影響18只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、缺血再灌注組和七氟烷預(yù)處理組。根據(jù)ZeaLonga等的改良方法建立大鼠右大腦中動(dòng)脈阻閉再灌注模型。對(duì)照組只分離血管不進(jìn)行插線，七氟烷預(yù)處理組在缺血再灌注前先接受1h的七氟烷預(yù)處理(2.4％)。再灌注24h后處死動(dòng)物，取缺血區(qū)腦組織制成石蠟塊，HE染色和透射電鏡觀察大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況；TUNEL法染色，比較各組大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞凋亡密度，探討七氟烷預(yù)處理在腦缺血再灌注損傷中的抗凋亡作用。

4、第三部分：七氟烷預(yù)處理對(duì)缺血再灌注損傷腦組織caspase-3的影響18只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、缺血再灌注組和七氟烷預(yù)處理組。根據(jù)ZeaLonga等的改良方法建立大鼠右大腦中動(dòng)脈阻閉再灌注模型。對(duì)照組只分離血管不進(jìn)行插線，七氟烷預(yù)處理組在缺血再灌注前先接受1h的七氟烷預(yù)處理(2.4％)。再灌注24h后處死動(dòng)物，取缺血區(qū)新鮮腦組織，采用Western-blot法檢測(cè)各組腦組織caspase-3前體及20000片段表達(dá)情況，研究七氟烷預(yù)處理可

5、能的抗凋亡機(jī)制。 結(jié)果 1.七氟烷預(yù)處理可顯著改善大鼠局灶性腦缺血再灌注24h后的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分。缺血再灌注組的梗死體積百分比為22.9±2.21％，而七氟烷預(yù)處理組的梗死體積百分比為15.2±1.52％，兩者相比有顯著性差異(P＜0.05)。 2.HE染色：對(duì)照組大腦皮質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)層次清晰，缺血再灌注組可見(jiàn)大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞層次欠清晰，可見(jiàn)較多典型凋亡細(xì)胞，七氟烷預(yù)處理組凋亡細(xì)胞分布較稀疏。電鏡：七氟烷預(yù)處理組易觀

6、察到正常神經(jīng)元形態(tài)，缺血再灌注組細(xì)胞排列紊亂，可見(jiàn)較多凋亡神經(jīng)元。TUNEL染色并計(jì)數(shù)神經(jīng)細(xì)胞凋亡密度(個(gè)/0.1mm2)：對(duì)照組，13.0±1.41；缺血再灌注組，189.8±6.79；七氟烷預(yù)處理組，110.5±4.32，兩兩相比均有顯著性意義(P＜0.05)。 3.caspase-3前體及20000片段檢測(cè)結(jié)果：各組caspase-3前體相對(duì)灰度值比較：對(duì)照組，16.72±2.96；缺血再灌注組，76.14±3.45；七氟

7、烷預(yù)處理組，51.15±3.10。各組20000片段相對(duì)灰度值比較：對(duì)照組，8.17±2.31；缺血再灌注組，58.95±6.28；七氟烷預(yù)處理組，31.23±5.43。兩兩相比均有顯著性意義(P＜0.05)。 結(jié)論 1.凋亡參與了腦缺血再灌注損傷的病理過(guò)程。 2.七氟烷預(yù)處理具有減輕大鼠局灶性腦缺血再灌注后神經(jīng)細(xì)胞凋亡的中樞直接保護(hù)作用。 3.抑制caspase-3前體表達(dá)及活化是七氟烷預(yù)處理抑制大鼠局