腎上腺素能受體激動(dòng)劑干預(yù)人子宮平滑肌細(xì)胞生長因子VEGF、FGF表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)以國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（編號(hào)：81072838）為依托進(jìn)行設(shè)計(jì)。在中醫(yī)學(xué)“情志學(xué)說”理論基礎(chǔ)上，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)“心理應(yīng)激”理論，以體外培養(yǎng)的人子宮肌瘤平滑肌細(xì)胞（簡稱ULM細(xì)胞）為研究對象，探討“肝郁－心理應(yīng)激”通過腎上腺素能受體（Adrenergic Receptor，AR）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，上調(diào)VEGF、FGF表達(dá)的作用機(jī)制，為臨床從“肝郁－心理應(yīng)激”角度防治子宮肌瘤（Uterine leiomyomas，ULM）提供新的

2、思路及方法，并為中醫(yī)學(xué)“情志學(xué)說”提供新的理論依據(jù)。
　　方法：采用膠原酶消化法對UL M細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，經(jīng)H E及免疫組化染色法進(jìn)行細(xì)胞學(xué)鑒定。將培養(yǎng)的ULM細(xì)胞分為4組：Α.空白組；B.去甲腎上腺素（Norepinephrine， NE）組；C.腎上腺素（Epinephrine，E）組；D.異丙腎上腺素（Isoproterenol，ISO）組。除Α組外，B組于培養(yǎng)液中添加NE：0.1μmol/l、1μmol/l、10μmol

3、/l；C組于培養(yǎng)液中添加E：0.1μmo l/l、1μmo l/l、10μmo l/l；D組于培養(yǎng)液中添加ISO：0.1μmo l/l、1μmo l/l、10μmol/l。應(yīng)用競爭性酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）分別于以下四個(gè)時(shí)間點(diǎn)：3h、6h、12h、24h檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor， VEGF）、成纖維細(xì)胞生長因子（Fibroblast growth fac

4、tor，F(xiàn)GF）的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.成功培養(yǎng)了原代ULM細(xì)胞，并經(jīng)HE染色及免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定證實(shí)。
　　2.各組ULM細(xì)胞培養(yǎng)液中VEGF蛋白表達(dá)的比較
　?、貼 E對U LM細(xì)胞VE GF蛋白表達(dá)的影響
　　不同劑量組和空白組多重分析，各劑量組VEGF蛋白表達(dá)平均測量值均高于空白組（P=0.000），1劑量組VEGF蛋白表達(dá)平均測量值最高，1劑量組和10劑量組VEGF蛋白表達(dá)平均測量值一致，

5、差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.074）。
　　不同測量時(shí)間點(diǎn)多重分析，各測量時(shí)間點(diǎn)的VEGF蛋白表達(dá)平均測量值不同（P=0.000），6小時(shí)的VEGF蛋白表達(dá)平均測量值最高、隨后呈現(xiàn)下降趨勢。
　?、贓對U LM細(xì)胞V EGF表達(dá)量影響
　　不同劑量組和空白組多重分析，各劑量組VE GF蛋白表達(dá)平均測量值均高于空白組（P=0.000），10劑量組VEGF蛋白表達(dá)平均測量值最高。
　　不同測量時(shí)間點(diǎn)多重分析，各測量時(shí)間

6、點(diǎn)的V EGF蛋白表達(dá)平均測量值不同（P=0.000），6小時(shí)的VEGF蛋白表達(dá)平均測量值最高、隨后呈現(xiàn)下降趨勢。
　?、跧SO對ULM細(xì)胞VEGF表達(dá)量影響
　　不同劑量組和空白組多重分析，1劑量組和10劑量組VEGF蛋白表達(dá)平均測量值低于空白組（P=0.000）。0.1劑量組VEGF蛋白表達(dá)平均測量值與空白組相比差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.167）。
　　不同測量時(shí)間點(diǎn)多重分析，VE GF蛋白表達(dá)平均測量值隨測量時(shí)間

7、的延長呈下降趨勢，除12小時(shí)和24小時(shí) VEGF蛋白表達(dá)平均測量值一致外（P=1.000），其他測量點(diǎn)VEGF蛋白表達(dá)平均測量值不同，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.各組ULM細(xì)胞培養(yǎng)液中FGF蛋白表達(dá)的比較
　?、貼E對ULM細(xì)胞FGF蛋白表達(dá)的影響
　　不同劑量組和空白組多重分析，1劑量組和10劑量組FGF蛋白表達(dá)平均測量值高于空白組（P=0.003，P=0.001）。其余各組間組FGF蛋白表達(dá)平均測

8、量值差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　不同測量時(shí)間點(diǎn)多重分析，6小時(shí)和12小時(shí)的FGF蛋白表達(dá)平均測量值分別高于3小時(shí)FGF蛋白表達(dá)平均測量值（P=0.015，P=0.003），其余測量時(shí)間點(diǎn)的FGF蛋白表達(dá)平均測量值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　?、贓對U LM細(xì)胞F GF蛋白表達(dá)的影響
　　不同劑量組和空白組多重分析，1劑量組和10劑量組FGF蛋白表達(dá)平均測量值高于空白組（P=0.020，P=0.00

9、0），0.1劑量組 FGF蛋白表達(dá)平均測量值與空白組一致，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.322）。
　　不同測量時(shí)間點(diǎn)多重分析，6小時(shí)和12小時(shí)的FGF蛋白表達(dá)平均測量值分別高于3小時(shí)的FGF蛋白表達(dá)平均測量值（P=0.000，P=0.001），其余測量時(shí)間點(diǎn)的FGF蛋白表達(dá)平均測量值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　?、跧SO對ULM細(xì)胞F GF蛋白表達(dá)的影響
　　不同劑量組和空白組多重分析，各劑量組FGF蛋白表達(dá)平

10、均測量值均低于空白組FGF蛋白表達(dá)平均測量值（P=0.000）。
　　不同測量時(shí)間點(diǎn)多重分析，24小時(shí)的FGF蛋白表達(dá)平均測量值低于3小時(shí)和12小時(shí)的FGF蛋白表達(dá)平均測量值（P=0.005，P=0.042），其余測量時(shí)間點(diǎn)的FGF蛋白表達(dá)平均測量值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.腎上腺素能受體激動(dòng)劑NE、E可促進(jìn)ULM細(xì)胞VEGF、FGF的表達(dá)。
　　2.腎上腺素能受體激動(dòng)劑ISO可降低