Wnt-PCP-JNK信號通路在NTDs發(fā)生及牛磺酸預(yù)防NTDs的介導(dǎo)作用.pdf

1、研究目的：（1）探討?；撬釋ι窠?jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用以及其分子機(jī)制；（2）探討Wnt/PCP-JNK信號通路在NTDs發(fā)生及?；撬犷A(yù)防NTDs的介導(dǎo)作用機(jī)制。
　　研究方法：
　　第一部分：體外培養(yǎng)小鼠永生性海馬神經(jīng)元細(xì)胞，設(shè)計(jì)（1）正常對照組；（2）谷氨酸損傷凋亡組；（3）?；撬岬蛣┝勘Ｗo(hù)組；（4）牛磺酸高劑量保護(hù)組。顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，MTT法檢測細(xì)胞的存活率，免疫熒光及Western-Blot檢測caspase-9蛋白

2、的表達(dá)。
　　第二部分：用維甲酸誘導(dǎo)神經(jīng)管發(fā)育畸形小鼠模型，設(shè)計(jì)：（1）正常對照組；（2）維甲酸致畸組；（3）?；撬岣深A(yù)組。解剖顯微鏡下統(tǒng)計(jì)各組的神經(jīng)管畸形發(fā)生情況，免疫組化及western blot檢測各組Dvl，RhoA及JNK磷酸化的表達(dá)情況。
　　研究結(jié)果：
　　第一部分：正常對照組細(xì)胞數(shù)量多，生長狀態(tài)良好；損傷凋亡組細(xì)胞數(shù)量少；牛磺酸保護(hù)組較損傷組生長狀態(tài)良好。MTT監(jiān)測細(xì)胞存活力：海馬神經(jīng)元細(xì)胞經(jīng)谷氨酸損傷

3、后，細(xì)胞活力明顯下降，與空白對照組和?；撬峤M比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；免疫熒光以及Western blot結(jié)果顯示損傷凋亡組較正常對照組Caspase9的陽性表達(dá)明顯增高,?；撬岜Ｗo(hù)組中Caspase9的陽性表達(dá)比損傷組明顯降低。
　　第二部分：解剖鏡下觀察維甲酸致畸形組主要表現(xiàn)為腦膨出畸形，畸形率較對照組增高，?；撬岣深A(yù)組較致畸組腦膨出輕微，較致畸組明顯減少，免疫組化檢測DVL及RhoA均廣泛表達(dá)于神經(jīng)管的神經(jīng)上皮細(xì)胞，致畸組對比

4、對照組DVL、RhoA在E9.5、E10.5均表達(dá)明顯增高,?；撬岣深A(yù)組較致畸組表達(dá)明顯降低，對Dvl，RhoA蛋白印記監(jiān)測致畸組對比對照組DVL、RhoA，JNK磷酸在E9.5、E10.5均表達(dá)明顯增高,?；撬岣深A(yù)組較致畸組表達(dá)明顯降低。
　　研究結(jié)論：
　?。?）牛磺酸可以通過明顯降低Caspase9的活化從而抑制神經(jīng)細(xì)胞的凋亡進(jìn)程起到神經(jīng)保護(hù)作用。
　　（2）Wnt/PCP-JNK信號蛋白通路關(guān)鍵蛋白分子DVL表