CPP及ER滯留信號(hào)在腫瘤治療性肽疫苗中的修飾研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文CPP及ER滯留信號(hào)在腫瘤治療性肽疫苗中的修飾研究姓名：王莉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：吳玉章20040501第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文 8 網(wǎng)的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程是兩個(gè)至關(guān)重要的環(huán)節(jié) 理論上 若促進(jìn)外源性抗原肽轉(zhuǎn)運(yùn)至 APC 胞漿或 ER 腔 則應(yīng)增強(qiáng)抗原肽被 MHC- 類分子呈遞的效率 因此 理想的外源性抗原肽傳輸方式應(yīng)該將外源性抗原肽靶向轉(zhuǎn)運(yùn)至胞漿或 ER設(shè)想一 將 T a tC P P 引入多肽疫苗的分子

2、設(shè)計(jì) 將多肽疫苗有效導(dǎo)入活細(xì)胞的胞漿 近年來(lái) 在細(xì)胞生物 基因治療及藥物體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)等研究領(lǐng)域中興起了對(duì)細(xì)胞膜通透性肽(cell- penetrating peptides CPP)的研究熱 CPP 屬于小分子肽類 長(zhǎng)度為幾個(gè)到幾十個(gè)氨基酸不等 研究證實(shí) CPP 可有效攜帶蛋白 多肽 DNA 甚至顆粒性物質(zhì)等通過(guò)受體依賴或非依賴方式 穿過(guò)大多數(shù)活細(xì)胞的質(zhì)膜進(jìn)入胞漿 并在一定濃度范圍內(nèi)對(duì)細(xì)胞無(wú)任何毒副作用 目前已有多種蛋白來(lái)源的 CPPs

3、得到證實(shí) 這些蛋白包括果蠅的antennapedia 蛋白 單純皰疹病毒的VP22 蛋白及 I 型人類免疫缺陷病毒(HIV-1)的 Tat 蛋白 Tat 蛋白是 HIV-1 的轉(zhuǎn)錄活化因子 含 86- 102 個(gè)氨基酸殘基 該蛋白可自由穿過(guò)活細(xì)胞質(zhì)膜 并且整個(gè)蛋白或片段(第 37-72 位氨基酸)可定位于胞漿及胞核研究表明 Tat 蛋白的堿性區(qū)(第 49-58 位氨基酸)對(duì)其實(shí)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)在化起關(guān)鍵作用 利用來(lái)源于該蛋白堿性區(qū)的肽片段可將其

4、它蛋白有效導(dǎo)入活細(xì)胞內(nèi)功 迄今為止 研究報(bào)道有數(shù)種長(zhǎng)短不一的源于 Tat 的短肽顯示出較強(qiáng)的穿膜功能 其中最短的片段是Tat49-57 我們?cè)O(shè)想 若將 Tat49-57 與 CTL 表位直接連接 可望借助 Tat49-57 的穿膜活性將抗原肽直接帶入細(xì)胞漿 最終使其有效進(jìn)入 MHC- 類抗原呈遞途徑設(shè)想二 將 E R 滯留信號(hào)肽引入多肽疫苗的分子設(shè)計(jì) 促使多肽疫苗直接靶向 E R研究表明 將 ER 轉(zhuǎn)位信號(hào)肽直接連到蛋白抗原的 N 末端

5、 可使抗原以一種 TAP非依賴的方式有效地被 APC 中的 MHC- 類分子呈遞 但這種 ER 轉(zhuǎn)位信號(hào)發(fā)揮其轉(zhuǎn)位功能的前提是它所引導(dǎo)的抗原分子必須位于胞漿內(nèi) 這使得 N 末端 ER 轉(zhuǎn)位信號(hào)肽在多肽類疫苗研究中的應(yīng)用受到限制 另一種 ER 靶向性轉(zhuǎn)運(yùn)的信號(hào)是位于蛋白 C 末端 以賴氨酸- 天冬氨酸- 谷氨酸- 亮氨酸(Lys- Asp-Glu-Leu KDEL) 為代表的 ER 滯留信號(hào)肽 ER 定居蛋白的 C 末端大部分都具有 KD

6、EL 或類似的基序 特異性識(shí)別并結(jié)合 KDEL 基序的受體主要集中于 ER 腔 高爾基體及中間區(qū) 研究表明 多種細(xì)菌或植物毒素的 C 末端具有 KDEL 或類似該序列的信號(hào)肽 它們可通過(guò) KDEL 受體介導(dǎo)的逆行轉(zhuǎn)運(yùn)方式 經(jīng)胞吞作用后從細(xì)胞外靶向至 ER 再由 ER 轉(zhuǎn)移至胞漿 最終發(fā)揮其細(xì)胞毒性作用 在另一些本身不含 KDEL 基序的毒素分子 C 末端添加 KDEL 基序后可明顯增強(qiáng)這些毒素在細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定性及毒性作用實(shí)驗(yàn)證實(shí) 在 pH