反義技術(shù)在腫瘤治療中的研究及進(jìn)展.pdf

1、鄭碩士＼＼乏≮，州大學(xué)位授予單位代碼!Q籩窆學(xué)號(hào)—0231—069密級(jí)——學(xué)論文論文題目：反義技術(shù)在腫瘤治療中的研究及進(jìn)展作者姓名：李安明學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)專業(yè)名稱：外科學(xué)導(dǎo)師姓名、職稱：僧國(guó)珍教授二零零五年五月十二日鄭州大學(xué)2005屆碩十畢業(yè)論文2反義技術(shù)的種類與作用機(jī)制反義技術(shù)包括反義DNA(antisenseDNA)與反義RNA(antisenseRNA)和核酶(ribozyme)。反義DNA為針對(duì)某個(gè)基因特定序列的互補(bǔ)DNA片段，常

2、用的是不超過30個(gè)堿基的反義寡聚脫氧核糖核苷酸(oligodeoxynucketide，ODN)。反義ODN分子可與特定的mRNA結(jié)合，形成DNA—RNA雜種分子(hybridmokecular)，與雙鏈DNA結(jié)合形成三聚體(triplex)，對(duì)復(fù)制與轉(zhuǎn)錄及翻譯過程產(chǎn)生影響，并可激活內(nèi)源性的核糖核酸酶，破壞與之結(jié)合的mRNA。反義RNA與特定的mRNA通過堿基間的氫鍵結(jié)合，抑制mRNA的翻譯并加速其降解。核酶是指一類具有酶催化活性的RN

3、A分子，與特定的底物mRNA分子結(jié)合后，在特定部位剪切mRNA，使其功能喪失。反義技術(shù)通過以下六種機(jī)制抑制特定基因的表達(dá)：①抑制DNA的復(fù)制過程成；②抑制DNA的轉(zhuǎn)錄過程：③抑制RNA跨核膜轉(zhuǎn)運(yùn)過程；④抑制前體mRNA的剪切過程；⑤抑制翻譯復(fù)合物的形成；⑥破壞mRNA結(jié)構(gòu)。3反義序列的設(shè)計(jì)由反義治療的原理可知，反義寡核苷酸序列的設(shè)計(jì)是保證反義治療效果的關(guān)鍵。反義寡核苷酸序列的設(shè)計(jì)應(yīng)滿足如下兩個(gè)條件：①要盡可能地提高反義治療的特異性，即所

4、設(shè)計(jì)寡核苷酸序列只與目的基因或mRNA序列上相關(guān)位點(diǎn)互補(bǔ)，而在其他基因上沒有同源序列。一般認(rèn)為mRNA分子中任何一段大于13bp或在DNA分子中大于17bp的堿基序列，在人類基因組中只出現(xiàn)一次，因此，所設(shè)計(jì)反義寡核苷酸序列只要大于17個(gè)bp，即可保證其特異性。②反義寡核苷酸在目的基因或mRNA上的作用位點(diǎn)不同，其抑制基因表達(dá)的效果也不同，因此要設(shè)計(jì)有效反義寡核苷酸，首先需在目的基因或mRNA上篩選最佳作用位點(diǎn)，然后根據(jù)該作用位點(diǎn)的堿基序

5、列設(shè)計(jì)出反義寡核苷酸的序列。從理論上講，mRNA起始密碼AUG所在位點(diǎn)，在翻譯起始時(shí)首先進(jìn)入核糖體，故該位點(diǎn)的mRNA呈單鏈狀態(tài)，這有利于反義寡核苷酸與之雜交，應(yīng)是反義寡核苷酸的有效作用靶點(diǎn)。研究者已經(jīng)建立起幾種技術(shù)，以便體外選擇反義作用靶點(diǎn)。目前常用的是反義寡核苷酸片段點(diǎn)陣發(fā)生退火反應(yīng)，或者采用RNAseH定位技術(shù)對(duì)所作用的靶點(diǎn)進(jìn)行可及性的評(píng)價(jià)。此外，也可以應(yīng)用計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)mRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)和折疊形式，輔助篩選反義作用位點(diǎn)。應(yīng)用計(jì)算機(jī)程