夏建川生物治療及在臨床腫瘤治療中的應用

1、腫瘤生物治療及在臨床腫瘤治療中的應用,中山大學腫瘤防治中心夏建川,腫瘤生物治療的概念,腫瘤生物治療主要通過機體的免疫機制或生物制劑的作用以調節(jié)機體自身的生物學反應, 從而達到治療腫瘤的目的。它主要包括腫瘤的基因治療、免疫治療和免疫基因治療。近年來，生物分子靶向藥物也納入生物治療的范疇。隨著分子生物學、腫瘤學和免疫學的發(fā)展，腫瘤的生物治療已成為繼手術、放療、化療后的第四種腫瘤治療模式，在臨床上已顯示出良好的應用前景。,一、基因治療,基

2、因治療（gene therapy）——應用分子生物學的技術向有功能缺陷的細胞補充相應功能基因，以糾正或補償其基因缺陷，從而達到治療的目的。對象： 體細胞 生殖細胞,基因治療被認為是多種重要疾病包括腫瘤治療的希望所在,1990 Ashanti de Silva，USA 1999 Jesse Gelsinger，USA 2000 Alain Fischer，France 2003 Adrian Thras

3、her，UK,Jesse Gelsinger，1999,Ashanti de Silva，1990,Alain Fischer，2003,（一）基因治療的曲折發(fā)展,2003 Adrian Thrasher,1990 Fresh Anderson,1969 Concept of gene therapy,1999年美國 Univ.of Pennsylvania 一例患者在接受腺病毒介導的基因治療過程中死亡。 2002-2003年

4、法國Necker-Enfants兒童醫(yī)院11例SCID患者接受了逆轉錄病毒介導的基因治療其中3例治愈后出現白血病樣癥狀。,Jesse Gelsinger，1999,Ashanti de Silva，1990,Alain Fischer，2003,基因治療遭遇的挫折,Nature 2003,January,421,305,Nature Biotechnology 2003,Febuary,vol 21,121,The Cause of

5、Leukemia:Insertion of activating retrovirus vector in Pro-oncogene LOM2 Locus.,,,,,EX 1,,,,,,Patient 5 Integration,Patient 4 Integration,MFG γC,MFG γC,EX 2,EX 6,,,,,LOM2,全世界基因治療臨床試驗共1714項,USA,UA,Australia,Germany,（二）S

6、trategy of Gene Therapy,To transfer a repair gene into a patient, the researchers must go through several steps :They must isolate the disease-related gene;It must be packaged in a vector, usually a disabled virus that

7、 cannot reproduce and cause disease, but that can act like a delivery truck to transport the gene inside the patient’cells;Once inside the body’s cells, the new gene can begin to function and restore health.,基因治療的必要條件,1

8、、發(fā)病機制在DNA水平上已經清楚；2、要轉移的基因已經克隆分離，其表達產物有詳盡的了解；3、該基因正常表達的組織可在體外進行遺傳操作理想的基因治療還必須：1、外源基因可有效導入靶細胞2、外源基因能在靶細胞中長期穩(wěn)定存留3、導入基因能適量表達4、導入基因的方法及載體對宿主細胞安全無害,腺病毒模式圖,利用第2代腺病毒載體（E1區(qū)和部分E3區(qū)缺失，E2A部分修飾），將人內皮抑素基因（human endostatin gene）的

9、表達盒，插入E1區(qū)，構建新型重組人內皮抑素腺病毒。,構建新型重組人內皮抑素腺病毒,,Fundamentals of Gene Therapy,The Gene Therapy of Severe Combine Immune Deficiency（SCID）,（三）腫瘤基因治療的研究策略,1、抗腫瘤細胞因子基因治療 通過將抗腫瘤細胞因子基因轉入腫瘤細胞或機體特定細胞使其持續(xù)高效分泌這種細胞因子以達到殺瘤目的的療法。（如腫瘤

10、壞死因子）。2、修正腫瘤相關基因的功能1）恢復抑癌基因的功能 最具代表性的腫瘤抑制基因為p53基因?，F已有腺病毒載體攜帶的p53基因治療。2）糾正癌基因的過度表達 利用反義RNA、核酸或肽核酸等反義技術及RNA干涉技術等 特異性地封閉基因表達的特性,抑制一些癌基因的過度表達,以 達到治療疾病的目的。如利用反義癌基因對惡性腫瘤的治療。,3、自殺基因治療：這類治療方案的原理是將編碼某種酶的基因（自殺基

11、因）轉染到腫瘤細胞中，這種酶能使某種藥物轉化為對細胞有害的物質，使腫瘤細胞DNA不能復制而死亡，這種藥物對正常細胞無毒害作用。例如：5－氟胞嘧啶系統(tǒng)。4、藥物抗性基因轉移治療：增強腫瘤細胞藥物敏感性和提高正常細胞對化療藥物的耐受性。給腫瘤細胞轉入某些藥物敏感基因可增強腫瘤細胞對化療藥物的敏感性；相反，耐藥基因治療則是對正常細胞進行修飾，使其具有比腫瘤細胞更強的對化療藥物的耐受力。,（四）基因治療的載體,基因治療載體可分兩大類: 病毒性

12、載體和非病毒性載體。1、病毒性載體：逆轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒、痘苗病毒、皰疹病毒等；2、非病毒載體：裸露ＤＮＡ、陽離子脂質體、ＤＮＡ包裝顆粒等,NIH & FDA: AAV Vector is the Most Safe Viral Vector for Gene Therapy,1. Non-pathogenic ，2. Inhibit replication of pathogenic virus， 3. I

13、nhibit oncogenesis,1、沒有致病性, AAV 是缺陷型病毒, 只能潛伏感染,不 能自主復制；2、可特異位點整合, AAV 可特異整合于人19 號染色 體上, 從而避免隨機整合導致細胞突變的危險。而且 染色體的整合可使轉導的基因長期穩(wěn)定表達；3、免疫源性弱,避免了病毒自身蛋白引起的免疫反應；4、感染的宿主細胞包括靜止細胞和分裂細胞。 AAV載體不能插入較大的外源基因，缺少高

14、效的包 裝細胞，制備過程復雜，制備滴度低等缺陷。,病毒是一種可利用的基因治療載體，它們對哺乳動物細胞的感染效率很高，能在靶細胞中高效表達目的基因。目前認為腺相關病毒(AAV)是人類基因治療研究中最理想的病毒載體之一，它較其他病毒載體有如下的優(yōu)點:,（五）腫瘤基因治療的臨床應用,腫瘤基因治療的策略主要包括： 抑癌基因替換治療； 抑制細胞表面生長因子受體基因治療； 抗血管生成基因治療。 其中，以p5

15、3抑癌基因替換治療研究開展的臨床試驗最為廣泛。目前發(fā)現多數惡性實體瘤含有p53的突變，臨床上采用腺病毒轉入野生型p53基因可在體內外抑制含有p53的突變癌細胞的生長，在此基礎上研究者們開展了相關的臨床試驗。,1、重組人p53腺病毒注射液（今又生），是一種廣譜抗癌藥，用于治療頭頸部鱗癌等惡性腫瘤，是經國家藥品食品監(jiān)督管理局批準的世界首個基因治療藥物。2、安柯瑞（重組人5型腺病毒注射液）：它利用腫瘤細胞內P53基因及其通路的變異，能識別腫

16、瘤細胞并將其殺死。適應癥：晚期鼻咽癌。3、恩度(針劑)：重組人血管內皮抑制素注射液， 作用機理是通過抑制形成血管的內皮細胞遷移來達到抑制腫瘤新生血管的生成，阻斷了腫瘤細胞的營養(yǎng)供給，從而達到抑制腫瘤增殖或轉移目的。,目前在我國已上市的腫瘤基因治療藥物,二、腫瘤免疫治療,腫瘤的免疫治療是以激發(fā)和增強機體的免疫功能或通過生物制劑的作用以調節(jié)機體自身的免疫反應,從而達到治療腫瘤的目的。 目前臨床上有許多腫瘤免疫治療的新觀點，臨床

17、方法多種多樣，一些臨床結果令人振奮，盡管有許多問題仍有待解決，但是可以樂觀的認為主動免疫治療和過繼性細胞免疫治療將以一種更加有效的方式來對抗腫瘤。,（一）腫瘤免疫理論的建立,腫瘤免疫的概念起源于上世紀初。1909年Ehrlich首先提出，免疫系統(tǒng)不僅負責防御微生物侵犯，而且能從機體內清除改變了的宿主成分。并提出了細胞免疫直接對抗腫瘤的概念，此后人們認識到癌細胞是改變了的宿主成分。上個世紀末，感染性疾病病原的發(fā)現和接種疫苗可以誘導免疫系

18、統(tǒng)產生對抗疾病的保護效應，對醫(yī)學研究產生了深遠的影響。正是以這些理論和原理為背景，產生了最初的理論，提出抗腫瘤保護性免疫反應的存在以及誘導和擴大這種反應的可能性。,六十年代經Thomas、Burnet和Good等人將該觀點系統(tǒng)化，提出了免疫監(jiān)視學說。免疫監(jiān)視學說的中心思想是：免疫系統(tǒng)具有一個十分完備的監(jiān)視功能，能準確地分辨“自己”和“非己”的成分；它不僅能清除外界侵入的各種微生物，排斥同種異體移植物，而且還能消滅機體內突變的細胞，防止腫

19、瘤的生長，保護機體的健康。每當免疫監(jiān)視功能由于這種或那種原因被消弱時，便為腫瘤的發(fā)生提供了有利條件；如果機體不具備免疫監(jiān)視功能，人類的腫瘤發(fā)病率會大大的提高。,（二）腫瘤免疫治療的方法,1、細胞因子療法 (IL-2, IFN-γ,IL-12,TNF-a)；2、生物分子靶向藥物：1）美羅華 注射液（利妥昔單抗注射液 ） 利妥昔單抗是一種嵌合鼠/人的單克隆抗體，該抗體與細胞膜的CD20抗原結合。如與B細胞上的CD20抗原結合，可引發(fā)

20、B細胞的溶解反應。適用于復發(fā)或化療抵抗性B淋巴細胞型非何杰金氏淋巴瘤的病人。2）抗人細胞表皮生長因子的單克隆抗體（C225） 西妥昔單體（cetuximab）為IgG1單克隆抗體，是表皮生長因子受體（EGFR）阻止劑，通過干擾腫瘤細胞表面的EGFR蛋白質的生長，達到抗腫瘤的目的。目前用于治療晚期結腸癌。,3）抗血管內皮生長因子（VEGF）配體的單克隆抗體（Avastin）: 研究發(fā)現VEGF在多種腫瘤，如腦瘤、肺癌、乳癌、

21、消化道腫瘤及泌尿道腫瘤等均有過度表達。 Avastin通過抑制VEGF的生物學活性，減少腫瘤新血管的形成，從而抑制腫瘤的生長和轉移，適用于聯合以5－FU為基礎的化療方案一線治療轉移性結直腸癌。4）表皮生長因子受體（EGFR）酪氨酸激酶抑制劑（Iressa）； 藥名吉非替尼，是一種選擇性表皮生長因子受體（EGFR）酪 氨酸激酶抑制劑，該酶通常表達于上皮細胞來源的實體瘤。適合于接受化療的局部晚期或轉移性非小細胞肺癌。5）表皮生長

22、因子受體（EGFR）抑制劑特羅凱（Tarceva ）： 它也是一種EGFR酪氨酸激酶結構磷酸化的阻斷劑。研究顯示，40－85%的非小細胞肺癌患者的EGFR呈陽性，Tarceva的作用機理與Iressa相似，都是抑制在腫瘤細胞中過度表達的EGFR酪氨酸激酶結構的活性而達到治療腫瘤的目的。,6）甲苯磺酸索拉非尼 (sorafenib)，多吉美 索拉非尼是首個口服多激酶抑制藥,靶向作用于腫瘤細胞和腫瘤血管上的絲氨酸和(或)蘇氨酸及受

23、體酪氨酸激酶,阻斷信號傳導,抑制腫瘤生長。2005年底經FDA批準上市,用于進展性腎臟細胞癌和轉移性或晚期肝細胞癌的治療。 7）蘋果酸舒尼替尼（sunitinib，sutent），索坦/SUTENT舒尼替尼是一種能抑制多個受體酪氨酸激酶的小分子，其中某些受體酪氨酸激酶參與腫瘤生長、病理性血管形成和腫瘤轉移的過程，美國FDA 2006年1月批準舒尼替尼用于治療胃腸道間質瘤(GIST)和不能手術的轉移腎細胞癌（MRCC）。,3、腫瘤疫苗

24、療法,腫瘤疫苗治療腫瘤是利用腫瘤細胞抗原或相應的核酸 進行治療腫瘤的方法。主要包括以下幾種： （1）基因修飾的腫瘤疫苗； （2）熱休克蛋白疫苗； （3）腫瘤抗原肽疫苗； （4）核酸疫苗； （5）樹突狀細胞（DC）疫苗 （6）DC/腫瘤融合細胞疫苗； （7）CA125的抗獨特型抗體ACA125疫苗； （8）預防宮頸癌發(fā)生的HPV疫苗。,樹突狀細胞（DC）源自骨髓中的前體細胞，是已知機體內

25、抗原呈遞能力最強的細胞，比普通抗原呈遞細胞強1000倍，它能在機體內外捕獲抗原后，將信息傳遞給T、B淋巴細胞，從而引發(fā)一系列的特異性免疫應答反應。但該種細胞在機體內含量極低，占正常人外周血白細胞的1％左右。 近年來，聯合應用細胞因子體外培養(yǎng)大量DC獲得成功，為其功能及分化狀態(tài)的深入研究和在腫瘤生物治療領域中的應用創(chuàng)造了條件。因具有長長的樹突狀突起和星狀多形性而得名。,（1）樹突狀細胞疫苗,樹突狀細胞（DC）是功能最強的抗原遞呈

26、細胞，發(fā)揮重要的抗腫瘤功能,DC 腫瘤抗原攝取 誘導CTLs 對腫瘤細胞特異殺傷,,,2010.4.29 美國食品藥品管理局批準 Provenge (sipuleucel-T)，作為一種治療晚期前列腺癌患者的免疫活性細胞，這標志著癌癥進入一種新的治療：自身免疫活性細胞治療。利用前列腺癌組織中高表達的一種抗原，由DC負載這種抗原刺激自體的T淋巴細胞。將這些經體外刺激擴增的免疫活性細胞回輸給前列腺癌患者達到治療的目的。,,De

27、ndritic Cells,Highly specialized antigen presenting cellsActivate naïve T cellsGenerate cell-mediated immune response,Immature Dendritic Cell(Periphery),Mature Dendritic Cell(Lymphoid),人成熟DC的掃描電鏡圖,2011年諾貝爾生理學醫(yī)學獎

28、,,,Bruce A. Beutler Jules A. Hoffmann Ralph M. Steinman,2011年諾貝爾生理學或醫(yī)學獎揭曉，美國、法國三位科學家因在免疫學方面的發(fā)現獲獎。其中一半的獎金歸于Bruce A. Beutler和Jules A. Hoffmann，獲獎理由是在“Toll樣受體和先天免疫激活方面的發(fā)現”；另一半獎金歸于Ralph M. Steinman，獲獎理由是“發(fā)現

29、樹突狀細胞及其在獲得性免疫中的作用”。 美籍科學家比尤特勒和盧森堡籍科學家霍夫曼是因為發(fā)現“Toll樣受體（Toll-like Receptors，TLRs）及其配體”獲得2011年諾貝爾生理學或醫(yī)學獎,美國食品藥品管理局已批準一種自體免疫活性細胞治療前列腺癌的細胞類藥,2010.4.29 美國食品藥品管理局批準 Provenge (sipuleucel-T)，作為一種治療晚期前列腺癌患者的免疫活性細胞，這標志著癌癥進入一種新的治療：

30、自身免疫活性細胞治療。 Provenge誘導作用是通過抗原提呈細胞(APCs)負載前列腺癌酸性磷酸酶（PAP）抗原，繼而激活腫瘤特異的CD8+T細胞，殺滅前列腺癌細胞。這是FDA批準的第一種自體細胞免疫療法。,Provenge疫苗治療方案,GM-CSF-PAP治療機制,受試者：512名總體生存期：對照組 21.7個月，治療組25.8個月。3年存活率： 治療組 32% ，對照組只有23%。副作用：主要是發(fā)燒、發(fā)冷、疲勞和

31、疼痛。,治療結果,,DC疫苗的制備,BMDC,GM-CSF, IL-4, TNFα,成熟的DC,培養(yǎng)6~8 days,,,TNFα, IL-4GM-CSF,,PBDC,,,加腫瘤抗原,人成熟DC表型的流式細胞檢測（可見CD 80, CD 83，CD86高表達）,DC腫瘤疫苗制備流程,如何獲得高純度的腫瘤抗原？,國家發(fā)明專利---人腫瘤細胞的分離純化方法,未純化的人肺癌細胞,純化后的肺癌細胞,從肺癌腫瘤患者胸腹水中分離肺癌細胞,貼壁生

32、長的肺癌細胞,從手術后腎癌組織中分離純化腎癌細胞,未純化的人腎癌細胞,純化后的腎癌細胞,貼壁生長的腎癌細胞,從術后卵巢癌組織中分離純化卵巢癌細胞,未純化的人卵巢癌細胞,純化的人卵巢癌細胞,貼壁生長的卵巢癌細胞,樹突狀細胞疫苗在實體瘤治療中的策略（1）,,抽病人50ml-60ml外周血,分離單核細胞，體外誘導DC細胞,DC細胞負載自體腫瘤抗原，通過靜脈回輸給病人或經皮下注射,經腫瘤抗原負載DC細胞能刺激自體T細胞,產生強烈的抗腫瘤免疫應

33、答。,,,,,樹突狀細胞疫苗在實體瘤治療中的策略（2）,,抽病人50ml-60ml外周血,分離單核細胞，體外誘導DC細胞,DC細胞負載自體腫瘤抗原并與自體的淋巴細胞混合，刺激自體T細胞產生細胞毒性T淋巴細胞,將這些細胞毒性T淋巴細胞通過靜脈回輸給病人,直接殺傷腫瘤腫瘤細胞,,,,,（2）樹突狀細胞與腫瘤細胞融合 疫苗誘導機體產生主動抗腫瘤免疫,樹突狀細胞表達高水平的共刺激分子，能在體內外直接激活初始T細胞，調節(jié)免疫應答的起始

34、，促進T輔助細胞和細胞毒性T淋巴細胞(Cytotoxical T lymphocyte CTL)的生成，也能促進B細胞生成抗體。 近年來，隨著對DC攝取、遞呈抗原機理的不斷認識, DC培養(yǎng)方法的不斷成熟和完善，針對腫瘤的免疫原性弱的免疫特點而設計的DC/腫瘤融合細胞疫苗已成為該領域的熱點之一。,腫瘤細胞表面抗原的多樣性,腫瘤細胞模式圖,腫瘤抗原免疫原性弱，難以激活有效的機體免疫,人乳腺癌細胞電鏡掃描圖,分化成熟的DC模式圖,

35、,Strategy of Fusion,,,DC與腫瘤細胞融合,自體DC/腫瘤融合細胞疫苗,原代腫瘤細胞,成熟DC細胞,自體DC/腫瘤融合細胞疫苗,,,,,PBMNC（50-60ml）,融合,,TNFα, IL-4GM-CSF,腫瘤細胞純化技術,,,,術后腫瘤組織,,自體DC/腫瘤融合細胞疫苗治療策略（1）,抽病人50ml-60ml外周血,分離單核細胞，體外誘導DC細胞,DC/融合細胞疫苗經皮下注射,DC/融合細胞疫苗能刺激自體T細

36、胞,誘導產生的抗腫瘤免疫應答。,,,,,制備DC/腫瘤融合細胞疫苗,,,自體DC/腫瘤融合細胞疫苗治療策略（2）,抽病人50ml-60ml外周血,分離單核細胞，體外誘導DC細胞,DC/腫瘤融合細胞與淋巴細胞混合，刺激產生細胞毒性T淋巴細胞,細胞毒性T淋巴細胞通過靜脈回輸給病人,直接殺傷腫瘤細胞,,,,,,制備DC/腫瘤融合細胞疫苗,,,（1）抗原激活的殺傷細胞(TAK)；（2）腫瘤浸潤性淋巴細胞（TIL）；（3）細胞毒性T淋巴細胞(

37、CTL)；（4）激活的殺傷性單核細胞(AKM)；（5）自然殺傷細胞(NK)；（6）細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK)。,2、腫瘤過繼性細胞免疫治療 向腫瘤患者輸入具有抗腫瘤活性的免疫細胞，直接殺傷腫瘤或激發(fā)機體抗腫瘤免疫效應，從而達到治療腫瘤的目的。主要包括以下幾類：,過繼性細胞免疫治療的過程,（1）CIK細胞治療腫瘤,“CIK細胞” 是將人的外周血單個核細胞在體外用多種細胞因子（如抗CD3McAb, IL-2, IF

38、N-γ, IL-1α等）共同培養(yǎng)一段時間后獲得的一群異質細胞，由于該種細胞同時表達CD3和CD56兩種膜蛋白分子，故又被稱為NK細胞樣T淋巴細胞，兼具有T淋巴細胞強大的抗腫瘤活性和NK細胞的非MHC限制性殺瘤優(yōu)點。目前，CIK細胞被認為是新一代抗腫瘤過繼免疫治療的方案之一.,,自體CIK細胞的制備,PBMNC 0.5-3×107（50ml）,24 個175cm的培養(yǎng)瓶,IFNγIl-2CD3 mAbIL 1α,12-

39、14 days 1~1.5×1010,,,,經淋巴細胞亞群檢測，CIK細胞的中CD3CD56雙陽性細胞的數量達到42.35%，,（2）自體DC細胞激活的CIK細胞治療腫瘤,通過體外誘導有功能的自體DC細胞，將這種有功能的自體DC細胞激活自體CIK細胞，產生一種更強的抗腫瘤的效應細胞（DC-CIK細胞），從而發(fā)揮其抗腫瘤作用。實驗證實，DC-CIK細胞能促進IL-12和INF-γ的分泌，提高細胞毒性，增強對腫瘤細胞的殺傷作用

40、，,自體DC-CIK 細胞的制備,,CIK細胞,成熟DC細胞,DC細胞刺激的CIK細胞（ 1~1.5×1010 ）,,,,,PBMNC 0.5-3×107（50ml）,共培養(yǎng),,TNFα, IL-4GM-CSF,IFN γ Il-2CD3 mAbIL 1α,,,,DC刺激的自體CIK細胞的表型,自體CIK、DC-CIK在惡性腫瘤治療中的策略,,抽腫瘤患者外周血（50－60ml）,體外誘導CIK、DC-C

41、IK細胞 (1x1010以上),回輸CIK、DC-細胞給患者(至少4次),殺傷殘留的腫瘤細胞，抑制腫瘤的復發(fā)和轉移,,,,（3）自然殺傷細胞（NK cells）治療腫瘤,NK細胞來源于造血細胞，其發(fā)育成熟依賴骨髓及胸腺微環(huán)境。具有抗細菌和病毒感染的作用，近來發(fā)現它們無需抗原預先作用，就可以直接殺傷腫瘤細胞。因此，在機體免疫監(jiān)視和早期抗感染免疫過程中起重要作用。,,自體自然殺傷細胞（NK cells）,PBMNC （30-40ml 外周血

42、）,12 個175cm的培養(yǎng)瓶,誘導NK培養(yǎng)試劑IL-2,NK細胞數量可達 2~3×109,,,,培養(yǎng)12-14天,經淋巴細胞亞群檢測，NK細胞的平均含量達到82.2 +/- 5.5%，,自體NK細胞的治療策略,抽腫瘤患者外周血(30-40ml),體外誘導NK細胞,每周回輸一次NK細胞給患者（至少4次）,回輸的NK細胞能提高機體免疫功能,殺傷殘留的腫瘤細胞，抑制腫瘤的復發(fā)和轉移,,,,,微創(chuàng)介入聯合CIK治療原發(fā)性肝癌,M

43、inimally Invasive Treatment Combined with Cytokine-Induced Killer Cells Therapy Lower the Short-Term Recurrence Rates of Hepatocellular Carcinomas. 1. Weng DS, Zhou J, Zhou QM, Zhao M, Wang QJ, Huang LX, Li YQ, Chen SP

44、, Wu PH, and Xia JC, Minimally invasive treatment combined with cytokine-induced killer cells therapy lower the short-term recurrence rates of hepatocellular carcinomas. J Immunother, 2008, 31 (1): 63-71.,體細胞免疫治療聯合常規(guī)療法增

45、效舉例,肝癌的手術和局部病癥的栓塞化療（TACE and Operation） —— 器官水平的整體治療（Entirety therapy in organ-level ） 射頻消融（RFA ） —— 局部的強化治療（Focal intensive therapy）體細胞免疫治療（Adoptive cell Immuninotherapy —— 殺傷微小的腫瘤病灶（Aim directly at m

46、icroscopic lesions or sub-image lesions）,原發(fā)性肝癌個體化治療模式研究,,,The expression of surface markers of CIK cells from 1 patient. The percentages of CD3+CD56+, were 34.5%,,Figure 5　85名原發(fā)肝癌患者生存曲線CIK治療組6、12、18個月時無復發(fā)生存率分別為93.3%、 9